Алгоритм определения группы крови с помощью цоликлонов

Определение группы крови цоликлонами: алгоритм

Все в организме человека обусловлено выработкой различных веществ. Не исключением является и группа крови, тип которой зависит от антигенного состава эритроцитов.

Современная медицина быстро развивается, и определение группы крови уже давно не в новинку. Существует множество методов ее определения. Одним из наиболее широко распространенных является определение группы крови цоликлонами.

Что это такое?

Цоликлоном называют специальное антитело, реагирующее с антигенами, расположенными на поверхности мембран эритроцитов. Для их получения используют методы генной инженерии – вначале получают специальные бактерии, которые вводят в организм мышей. После иммунизации организма мыши получают ее асцитную жидкость, из которой впоследствии и выделяют необходимые антитела.

Они представляют собой иммуноглобулины класса М.

Благодаря особой технологии изготовления, цоликлоны безопасны для человека в эпидемиологическом плане.

Вещество выпускается в виде водно-солевого раствора, который добавляют к имеющимся образцам крови. Для каждой группы антигенов имеется собственный раствор цоликлона – анти-А цоликлон имеет розовую окраску, анти-В – голубую, а цоликлон анти-D бесцветен.

Свое название препараты получили от названия места, где они были созданы – Центральный ордена Ленина институт переливания крови в Москве.

Методика определения

Определение группы крови цоликлонами может проводиться в нативной крови с добавлением консерванта или без него, а также при исследовании капиллярной крови, взятой из пальца. Непосредственно определение группы проводится на специальной пластине или планшете.

В первую очередь, на планшет наносится капля раствора цоликлона под соответствующей пометкой. Рядом с раствором цоликлона наносится капля исследуемой крови, и они смешиваются между собой. Определение группы крови цоликлонами проводится при равномерном покачивании пластины из стороны в сторону. Визуально, наблюдается агглютинация эритроцитов (слипание их между собой). Если результат отрицательный, агглютинации не происходит.

Процедура обязательно проводится при соблюдении определенного температурного режима – от 15 до 25 градусов тепла при нормальной освещенности. Перед проведением процедуры следует убедиться, что срок годности цоликлонов не истек.

В некоторых учреждениях с целью контроля за препаратами обязательно следует зафиксировать время открытия средства и срок его годности. Рекомендуется документально отразить срок годности реагента, если проводится определение группы крови цоликлонами. Фото используемых флаконов делают редко, однако подобная фиксация также возможна.

Интерпретация результатов

После проведения теста уже можно узнать, какая же группа крови у пациента.

Каковы же результаты исследования, если проводилось определение группы крови цоликлонами? Таблица сопоставления цоликлона и группы крови позволяет разобраться в полученных результатах.

цоликлон	1. I(Rh+)	2. I(Rh-)	3. II(Rh+)	4. II(Rh-)	5. III(Rh+)	6. III(Rh-)	7. IV(Rh+)	8. IV(Rh-)
Анти-А			+	+			+	+
Анти-В					+	+	+	+
Анти-D	+		+		+		+

Как видно из таблицы, если агглютинация произошла в ячейке пластины под номером 3 или 4, значит, кровь второй группы (агглютинация осуществилась за счет взаимодействия антигена А, расположенного на мембране эритроцита, и специального антитела, присутствующего в растворе анти-А-цоликлона). Соответственно, если агглютинация наблюдается в ячейке номер 5 или 6, то и группа крови – третья. Если агглютинации не произошло ни в одном указанном секторе, значит, исследуемая кровь не имеет антигенов, на что напрашивается вывод, что группа крови – первая.

Возможно, что агглютинация происходит во всех лунках. Обычно, это говорит о некачественном препарате либо нарушении правил проведения исследования.

Для чего проводится определение группы крови цоликлонами?

В настоящее время цоликлоны используются преимущественно для определения группы крови и резус-фактора. Исследование может проводиться как планово, по назначению участкового врача-терапевта, так и по экстренным показаниям, когда требуется переливание крови (в ходе операции произошла массивная кровопотеря или пациент был доставлен с обширной травмой и массивным кровотечением).

В поликлинике определение группы проводится преимущественно за счет использования сывороток. Группа крови по цоликлонам определяется чаще всего в стационаре или специализированных лабораториях.

К использованию цоликлонов прибегают, обычно, при невозможности использования сывороток.

Скорость получения результатов несколько быстрее, чем при исследовании стандартными сыворотками, что делает методику более универсальной. Многие лаборатории стремятся перейти на использование данного метода.

Препараты цоликлонов

Какие же есть разновидности цоликлональных препаратов?

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D (есть три разновидности – супер, вызывающая прямую агглютинацию, просто анти-D-цоликлон, при добавлении которого развивается непрямая агглютинация, и анти-D-микс препарат, имеющий в своем составе компоненты первых двух). Они позволяют не только определить группу крови цоликлонами, но и выявить резус-принадлежность.

Другие растворы отличаются сугубо по названию, так как входящие в них антитела – иммуноглобулины классов М и G позволяют только типировать кровь по стандартным, АВ0, антигенам. Различие между ними заключается только в механизме слипания эритроцитов (прямая или непрямая агглютинация).

Каждый из данных препаратов имеет срок годности и особенности использования. Однако наибольшее распространение в клинической лабораторной диагностике получили только три препарата, указанные выше (анти-А, анти –В, анти-D).

Неправильная трактовка результатов

Иногда возможно получение ложных, недостоверных результатов. Например, агглютинация произошла во всех ячейках планшетки или при добавлении крови к препарату, например, изменился их цвет.

Чтобы предотвратить подобные результаты, если проводится определение группы крови цоликлонами, алгоритм процедуры предусматривает некоторые правила. В первую очередь следует обратить внимание на срок годности цоликлонов. Реагенты с истекшим сроком обращения использовать недопустимо.

Обязательно следует соблюдать и условия проведения процедуры. В помещении должно быть оборудовано рабочее место с достаточным освещением и температурным режимом. Если в инструкции к препарату описана и необходимая влажность в помещении, необходимо учитывать и ее.

Немаловажным является и чистота рабочей планшетки, загрязнение которой часто приводит к ошибкам в исследовании и получению неправильных результатов.

Где можно провести исследование?

Определение группы крови цоликлонами получает все большее распространение. Если раньше данная процедура проводилась только в специализированных стационарах (например, сугубо в отделениях хирургии и гематологии), то сейчас данная процедура доступна практически в любой оборудованной лаборатории.

Данная методика начинает распространяться и в поликлинической сети для экспресс-определения группы крови и скорейшего выставления диагноза пациенту.

Многие центры частной медицины и косметологии предлагают проведение данной услуги на платной основе. Бесплатно процедура, как уже было сказано, проводится при наличии направления терапевта.

Если нет возможности обратиться в поликлинику, то как определить группу крови по цоликлонам? При наличии дома специальной планшетки и набора препаратов, исследование можно проводить и самостоятельно, помня, однако, о необходимости соблюдения условий процедуры и особенно – стерильности.

syl.ru

15. Определение резус-фактора с помощью цоликлона:

Поместите каплю цоликлона «анти-Д» на тарелку или пластину.
Капля цоликлона должна быть в 10 раз больше капли исследуемой крови /цоликлон – 0,1мл, кровь – 0,01мл/.
Тщательно смешайте цоликлон с исследуемой кровью.
Наблюдайте реакцию от 2-5мин. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. При отрицательном результате капли остаются равномерно окрашенными в красный цвет и агглютинация в них не наблюдается.

16. Алгоритм дезинфекции планшета для определения групп крови.

Лунки планшета, в которых определяли группы крови, залейте 3% раствором хлорамина или другим дезинфицирующим средством, разрешенным для работы в вашей лаборатории, на 1 час.
Через 1 час смойте дезинфицирующее средство проточной водой.
Протрите планшету сухой ветошью.

17. Определите длительность кровотечения капиллярной крови по Дуке:

Подсчитайте количество капель крови на фильтровальной бумаге.
Полученный результат умножьте на 30сек.
Полученный результата сравните с нормой.

/Длительность кровотечения – показатель, характеризующий первичный тромбоцитарно-сосудистый гемостаз. Норма – от 2 до 4мин./.

18. Подсчитайте количество эритроцитов в камере Горяева:

К боковым полям камеры Горяева плотно притрите покровное стекло.
Стекло притирается легким нажимом на боковые края большими пальцами правой и левой руки до появления радужных колец Ньютона.
Заполните камеру Горяева с помощью стеклянной палочки или Пастеровской пипетки, предварительно тщательно перемешав жидкость в пробирке, чтобы взвесь форменных элементов была равномерной./При заполнении камеры жидкость не должна попадать в борозды и в камере не должно быть пузырьков воздуха/.
После заполнения камеры оставьте ее стоять на 1-2мин на предметном столике микроскопа, чтобы элементы крови осели на дно камеры и движение их прекратилось.
Настройте микроскоп для работы – подсчет ведите под малым увеличением опущенным конденсором и прикрытой диафрагмой.
Подсчитайте число эритроцитов в пяти больших квадратах, расположенных по диагонали, каждый из которых разграфлен на 16 малых квадратиков.
Полученное число эритроцитов умножьте на 10000 – получите количество эритроцитов в 1мм кубическом. В норме количество эритроцитов у женщин 3,9 – 4,7 на 10 в 12 степени на литр. У мужчин – 4,0 – 5, 0 на 10 в 12 степени на литр.

19. Подсчитайте количество лейкоцитов в камере Горяева:

К боковым полям камеры Горяева плотно притрите покровное стекло.
Стекло притирается легким нажимом на боковые края большими пальцами правой и левой руки до появления радужных колец Ньютона.
Заполните камеру Горяева с помощью стеклянной палочки или Пастеровской пипетки, предварительно тщательно перемешав жидкость в пробирке, чтобы взвесь форменных элементов была равномерной. /При заполнении камеры жидкость не должна попадать в борозды и в камере не должно быть пузырьков воздуха/.
После заполнения камеры оставьте ее стоять на 1-2мин на предметном столике микроскопа, чтобы элементы крови осели на дно камеры и движение их прекратилось.
Настройте микроскоп для работы – подсчет ведите под малым увеличением опущенным конденсором и прикрытой диафрагмой.
Подсчитайте число лейкоцитов в ста больших не разграфленных квадратах, которые располагаются по четыре квадрата.
Полученное число лейкоцитов умножьте на 50 – получите количество лейкоцитов в 1мм кубическом. В норме количество лейкоцитов в 1мм кубическом равно от 4-х до 9-ти тысяч, т.е. от 4 до 9х 10 в 9 степени на литр.

StudFiles.ru

РАБОТА № 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ И РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ.

Моноклинальные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей – носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Имеются и цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с для определения резус принадлежности крови.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ, а также Анти-D, Анти-С, Анти-с по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом. Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек., но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В или резус-антигена. При использовании цоликлонов термостатировать не требуется,

Рис. 1. Определение группы крови с помощью цоликлонов.

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Наличие агглютинации с Анти-D, Анти-С или Анти-с цоликлонами свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.

studopedia.ru

/ переливание крови / Алгоритм 12 Определение группы крови с цоликлонами

Алгоритм 12

Определение группы крови с применением цоликлонов.

Послідовність

Зміст

Примітка

Місце виконання.

Підготувати необхідне.

Попередня підготовка до виконання навику.

Алгоритм виконання.

Заповнити медичну документацію

Маніпуляційна.

Стерильні марлеві кульки.
96% етиловий спирт.
Стерильний скарифікатор.
Стерильні скляні скельця, палички.
Цоліклони анти – А та анти – В.
Посуд для використаного матеріалу.

Одягти халат, шапочку, маску, окуляри, фартух.
Помити руки під проточною водою з милом, витерти рушником.
Одягнути дві пари стерильних гумових рукавичок.
З фаланги четвертого пальця правої руки хворого взяти краплю крові (на предметне скло).

1. Розкрийте ампули цоліклонів анти-А та анти-В і дві ампули з розчинниками, змішайте та дочекайтесь повного розчинення.

2. Нанесіть на обезжирену емальовану тарілку краплину цоліклону анти-А та анти-В.

3. Додайте до них в 10 разів меншу краплину крові папцієнта у співвідношенні 10:1.

4. Змішайте кров з цоліклонами за допомогою скляних паличок.

5. Оцініть результат через 2 – 3 хвилини при денному освітленні.

6. Продезінфікуйте посуд та обладнання.

1. Дотримуйтесь часу (1-2 хвилини).

2. Дотримуйтесь співвідношення крові, що досліджується та цоліклонів.

3. Можна використовувати різні краї предметного скла.

4. Дотримуйтесь часу.

5. Занурте в 5% розчин хлораміну на 1 годину.

StudFiles.ru