Определение гемоглобина в крови

3) Определение количества гемоглобина в крови по способу сали

Определение содержания гемоглобина в крови производится колориметрическими способами, один из которых (гематиновый метод Сали) основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с соляной кислотой. Принцип колориметрического способа заключается в том, что если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотносится как их объемы. В стандартном растворе гемоглобина содержится 167 г/л.

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику определения гемоглобина и найти содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: гемометр Сали, капилляр с меткой 0,02 мл, 0,1 н раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, свежая кровь, пипетка, стеклянная палочка, стерильная инъекционная игла, вата, спирт, йод, эфир, стерильный скарификатор. Объект исследования - человек.

Х о д р а б о т ы

В среднюю пробирку гемометра налить 0,1 н раствор соляной кислоты до нижней кольцевой метки. Из пальца обычным способом набрать в капилляр кровь без пузырьков до метки. Излишек крови можно удалить из капилляра прикладыванием ваты или фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдуть кровь на дно пробирки из капилляра так, чтобы верхний слой кислоты остался неокрашенным. Не вынимая капилляр, промыть его раствором соляной кислоты из верхнего слоя пробирки гемометра. После этого содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой и поставить в гемометр на 5-10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин

Затем к содержимому пробирки прибавить по каплям дистиллированную воду, каждый раз перемешивая раствор стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет полученного раствора не станет одинаковым с цветом стандартного раствора боковых ампул гемометра. Цифра, стоящая на уровне нижней границы мениска полученного раствора отражает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах (г%).

Перевод полученных данных в единицы системы СИ (в г/л) производят путем умножения измеренного количества гемоглобина в г% на 10. Зарисовать гемометр и капилляр.

В выводе сравнить с нормой полученное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

4) Подсчет количества эритроцитов

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику и определить количество эритроцитов в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для эритроцитов, 3 % раствор хлорида натрия, покровные стекла, регулируемая пипетка, пробирки, стерильный скарификатор, вата, спирт, эфир, йод. Объект исследования - человек.

Х о д р а б о т ы

Необходимо перед началом работы рассмотреть счетную камеру под микроскопом, найти малые квадратики и большие квадраты сетки (рис.1). Камеру предварительно необходимо подготовить путем притирания покровного стеклышка к боковым выступающим граням камеры до появления цветных (ньютоновских) колец. В каплю свежей крови, полученной из пальца, погрузить кончик меланжера (с красной бусинкой в расширении) для эритроцитов и набрать кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не

попали пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь не свернулась, перенести кончик меланжера в 3 % раствор хлорида натрия и набрать его до метки 101, т.е. развести кровь в 200 раз. После этого взять заполненный меланжер (смеситель), зажать его концы 1 и 3 пальцами и в течение 1 мин встряхи-

вать. После тщательного перемешивания крови, удалив предварительно 1-2 капли, нанести небольшую капельку на сетку камеры.

При необходимости такое же разведение может быть выполнено другим способом. Например, 0,02 мл крови смешать с 4 мл 3 % NaCl в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае тщательно перемешивается.

Если капля разведенной крови будет слишком велика, то жидкость может попасть на боковые грани камеры и высота слоя над сеткой будет больше 0,1 мм. В этом случае камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Разведенную (в меланжере) кровь следует еще раз перемешать.

Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступить к подсчету. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении.

Необходимо подсчитать число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например, по диагонали. Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствоваться правилом Егорова, согласно которому, относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе для данного квадратика не учитываются.

Формула для вычисления количества эритроцитов в 1 мм3 крови:

А х 4000 х 200

N = ————————, где:

80

N - искомое число эритроцитов;

А - число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или в 5 больших);

4000 - множитель для получения содержания эритроцитов в одном мм3 крови;

200 - степень разведения эритроцитов.

Для перевода полученного количества эритроцитов в единицы СИ, подсчитанное количество эритроцитов умножить на 106 и выразить в N х 1012 /л (тера на литр). Зарисовать фрагмент сетки камеры Горяева с маленькими и большими квадратами.

В выводе сравнить количество подсчитанных эритроцитов с нормой.

StudFiles.ru

3) Определение количества гемоглобина в крови по способу сали

Определение содержания гемоглобина в крови производится колориметрическими способами, один из которых (гематиновый метод Сали) основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с соляной кислотой. Принцип колориметрического способа заключается в том, что если исследуемый раствор путем разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворенных веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотносится как их объемы. В стандартном растворе гемоглобина содержится 167 г/л.

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику определения гемоглобина и найти содержание гемоглобина в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: гемометр Сали, капилляр с меткой 0,02 мл, 0,1 н раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, свежая кровь, пипетка, стеклянная палочка, стерильная инъекционная игла, вата, спирт, йод, эфир, стерильный скарификатор. Объект исследования - человек.

Х о д р а б о т ы

В среднюю пробирку гемометра налить 0,1 н раствор соляной кислоты до нижней кольцевой метки. Из пальца обычным способом набрать в капилляр кровь без пузырьков до метки. Излишек крови можно удалить из капилляра прикладыванием ваты или фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдуть кровь на дно пробирки из капилляра так, чтобы верхний слой кислоты остался неокрашенным. Не вынимая капилляр, промыть его раствором соляной кислоты из верхнего слоя пробирки гемометра. После этого содержимое пробирки перемешать стеклянной палочкой и поставить в гемометр на 5-10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин

Затем к содержимому пробирки прибавить по каплям дистиллированную воду, каждый раз перемешивая раствор стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет полученного раствора не станет одинаковым с цветом стандартного раствора боковых ампул гемометра. Цифра, стоящая на уровне нижней границы мениска полученного раствора отражает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах (г%).

Перевод полученных данных в единицы системы СИ (в г/л) производят путем умножения измеренного количества гемоглобина в г% на 10. Зарисовать гемометр и капилляр.

В выводе сравнить с нормой полученное содержание гемоглобина в исследуемой крови.

4) Подсчет количества эритроцитов

Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику и определить количество эритроцитов в исследуемой крови.

Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для эритроцитов, 3 % раствор хлорида натрия, покровные стекла, регулируемая пипетка, пробирки, стерильный скарификатор, вата, спирт, эфир, йод. Объект исследования - человек.

Х о д р а б о т ы

Необходимо перед началом работы рассмотреть счетную камеру под микроскопом, найти малые квадратики и большие квадраты сетки (рис.1). Камеру предварительно необходимо подготовить путем притирания покровного стеклышка к боковым выступающим граням камеры до появления цветных (ньютоновских) колец. В каплю свежей крови, полученной из пальца, погрузить кончик меланжера (с красной бусинкой в расширении) для эритроцитов и набрать кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не

попали пузырьки воздуха. Быстро, пока кровь не свернулась, перенести кончик меланжера в 3 % раствор хлорида натрия и набрать его до метки 101, т.е. развести кровь в 200 раз. После этого взять заполненный меланжер (смеситель), зажать его концы 1 и 3 пальцами и в течение 1 мин встряхи-

вать. После тщательного перемешивания крови, удалив предварительно 1-2 капли, нанести небольшую капельку на сетку камеры.

При необходимости такое же разведение может быть выполнено другим способом. Например, 0,02 мл крови смешать с 4 мл 3 % NaCl в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае тщательно перемешивается.

Если капля разведенной крови будет слишком велика, то жидкость может попасть на боковые грани камеры и высота слоя над сеткой будет больше 0,1 мм. В этом случае камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Разведенную (в меланжере) кровь следует еще раз перемешать.

Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступить к подсчету. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении.

Необходимо подсчитать число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например, по диагонали. Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствоваться правилом Егорова, согласно которому, относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе для данного квадратика не учитываются.

Формула для вычисления количества эритроцитов в 1 мм3 крови:

А х 4000 х 200

N = ————————, где:

80

N - искомое число эритроцитов;

А - число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или в 5 больших);

4000 - множитель для получения содержания эритроцитов в одном мм3 крови;

200 - степень разведения эритроцитов.

Для перевода полученного количества эритроцитов в единицы СИ, подсчитанное количество эритроцитов умножить на 106 и выразить в N х 1012 /л (тера на литр). Зарисовать фрагмент сетки камеры Горяева с маленькими и большими квадратами.

В выводе сравнить количество подсчитанных эритроцитов с нормой.

StudFiles.ru

8) Определение концентрации гемоглобина

Определение концентрации гемоглобина

Унифицированным в России и многих других странах является геми-глобинцианидный метод определения гемоглобина крови. Определение ге­моглобина при помощи гемометра Сали (ГС-3) производиться не должно из-за низкой точности (ошибка составляет до20%), но до сих пор используется в некоторых лечебных учреждениях, не имеющих фотоэлектроколориметров или фотоэлектрических гемоглобинометров. Кроме того, данный метод при­годен для использования в полевых условиях.

И. Метод Сали

Принцип этого метода заключается в том, что все виды гемоглобина крови под влиянием соляной кислоты превращается з хлорид гематина (со­лянокислый гематин) бурого цвета, интенсивность окраски которого сравни­вают со стандартом.

Оснащение

1. Гемометр Сали ГС-3 (рис.10), который представляет собой штатив с 3 гнездами. В крайние гнезда вставлены запаянные пробирки со стандартной цветной жидкостью, соответствующей по спектральным характеристикам (цвету) и оптической плотности определенной концентрации хлорида гема­тина. В среднем гнезде находится градуированная пробирка с нижней круго­вой меткой (0,2 мл) и шкалой, которая показывает концентрацию гемоглоби­на в (граммы гемоглобина на 100 мл крови). Задняя стенка штатива за­крыта матовым стеклом.

  1. Стеклянная палочка.

  2. Пипетка объемом 0,02 мл.

  3. 0,1 Н раствор соляной кислоты.

  4. Дистиллированная вода.

6.Пипегка глазная.

  1. В центральную пробирку гемометра до нижней круговой метки вно­сят 0,1К раствор соляной кислоты.

  2. Пипеткой набирают 0,02 мл крови. Тщательно вытирают кончик пи­петки снаружи. Вносят кровь на дно пробирки таким образом, чтобы верхний слой жидкости остался прозрачным. Повторными всасываниями и выдува­ниями промывают пипетку верхним слоем жидкости. Путем осторожного встряхивания содержимое пробирки перемешивают и, засекая время, остав­ляют стоять в течение 5 минут. Вследствие гемолиза и образования хлорида гематина смесь становится прозрачной и буреет.

  3. Через 5 минут к исследуемой жидкости добавляют дистиллирован­ную воду по каплям, каждый раз тщательно перемешивая смесь стеклянной палочкой. Разведение заканчивают, когда цвет жидкости сравняется с цветом стандартов. Цвет жидкости и стандартов необходимо сравнить при дневном освещении в проходящем свете, держа гемометр в вытянутой руке на уровне глаз.

  4. Определяют, какому делению шкалы соответствует нижний мениск жидкости. Цена деления шкалы соответствует 0,2 г/%.

Концентрацию гемоглобина пересчитывают в граммы на литр (г/л), для чего полученные данные умножают на 10.

Гемиглобинцианидный (циамметгемоглобиновмй) метод

Принцип этого метода заключается в том, что после взаимодействия с трансформирующим раствором, содержащим ацетонциангидрин, гемоглобин окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), который под влиянием CN-ионов образует окрашенный в красный цвет комплекс — цианметгемоглобин (ге-миглобинцианид). Оптическую плотность раствора определяют на универ­сальном или специальном фотоэлектроколориметре (гемоглобинометре).

Оснащение

  1. Гемоглобинометр фотоэлектрический типа ГЭ-3.

  2. Трансформирующий раствор с ацетонциангидрином.

  3. Пипетка объемом 0,02 мл.

  4. Пипетка объемом 5 мл.

  5. Пробирка.

Техника выполнения

  1. 0,02 мл крови приливают в 5 мл трансформирующего раствора в пробирки (разведение 1:250) и хорошо перемешивают.

  2. Через 10 минут (раствор остается стабильным в течение более 24 часов) измеряют на фотоэлектроколориметре оптическую плотность при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптиче­ского пути 10 мм против холостой пробы трансформирующего раствора или на гемоглобинометре.

  3. Концентрацию гемоглобина в «г/л» определяют по калибровочному графику, построенному с использованием стандарта гемиглобинцианида.

Источник ошибок

Отклонения получаемых значений могут быть связаны только с погрешно­стями взятия крови или с неисправностью фотометрической аппаратуры.

Опенка результатов

В норме концентрация гемоглобина в крови составляет: у женщин 120 -145 г/л, у мужчин- 130 - 165 г/л.Снижение концентрациигемоглобина обычно сочетается с эритропенией, а повышение - с эритроцитозом.

Концентрация гемоглобина после рождения составляет 210 г/л (180-240 г/л).Дальнейшая динамика этого показателя соответствует измене­ниям, наблюдающимся со стороны концентрации эритроцитов.

StudFiles.ru

Определение количества гемоглобина в крови

Цель работы: определить относительное и абсолютное содержание гемоглобина в крови.

Для работы необходимы: гемометр Сали, скарифи­катор, спирт, эфир, йод, 0,1 Н раствор соляной кислоты, дис­тиллированная вода, вата, фильтровальная бумага.

Ход работы. Определение гемоглобина в крови произ­водится колориметрическим методом с помощью гемометра Сали. В штативе гемометра три пробирки: две крайние запаяны и содержат раствор солянокислого гематина (16,7 гемоглоби­на), а одна средняя градуированная пробирка служит для исследования крови. В эту пробирку наливают 0,1 Н раствор соля­ной кислоты до нижней метки 10. Затем, обычным способом из пальца в градуированную пипетку набирают кровь до метки 20 и, обтерев кончик пипетки фильтровальной бумагой, выдувают кровь на дно пробирки. Не вынимая пипетки, промывают ее со­ляной кислотой из верхнего слоя, после этого содержимое про­бирки перемешивают и оставляют стоять 5—10 минут для прев­ращения гемоглобина в солянокислый гематин, окрашивающий раствор в коричневый цвет. К этому раствору прибавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора будет совершенно одинаков с цветом стандарт­ного раствора (добавляя воду, раствор перемешивают стеклян­ной палочкой).

Цифры, стоящие на уровне нижнего мениска, полученного раствора показывают абсолютное (в граммах) и относительное (в процентах, единицах) содержание гемоглобина в исследуе­мой крови. Запишите полученные данные содержания гемоглобина в ис­следуемой крови и сравните их с нормой. Сделать выводы.

Опыт № 7.

Определение цветного показателя крови

Цель работы: ознакомиться с методикой определения цветного показателя крови.

Ход работы. Для расчета цветного показателя необхо­димо определить количества гемоглобина и число эритроцитов. При вычислении цветного показателя (ЦП) берут соотношение выраженных в процентах к норме гемоглобина и эритроцитов в крови:

ЦП = (найденная концентрация гемоглобина·100)/16,7 : (количество эритороцитов·100)/5000000 ,

где 16,7 - нормальная концентрация гемоглобина;

5000000 – нормальное содержание эритроцитов в 1мм³.

Записать полученные результаты, сравнить их с нормой и сделать выводы.

Опыт № 8.

studopedia.ru

Читайте также