Определение группы крови и резус фактора цоликлонами

/ 29

29 Методы определения групп крови и резус-фактора. Профилактика возможных ошибок

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток. В лунки планшета для определения групп крови последовательно наносят пипетками по одной крупной капле стандартной сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных серий каждой группы. Затем наносят в каждую лупку по капле исследуемой крови, в 5 — 10 раз меньшую сыворотки. Сухими стеклянными палочками или путем покачивания планшета смешивают стандартные сыворотки и исследуемую кровь. Через 5 минут оценивают результат (табл. 2).

Таблица 2

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток

Группа исследуемой крови	Стандартные сыворотки
	0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	-	-	-
А(II)	+	-	+
В(III)	+	+	-
AB(IV)	+	+	+

Определение групп крови по стандартным эритроцитам. В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III). Капли перемешивают покачиванием планшета. Через 5 минут к каждой капле смеси добавляют по 1 капле физиологического раствора и учитывают результат.

Таблица 3

Определение групп крови с помощью стандартных эритроцитов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
	0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	-	+	+
А(II)	-	-	+
В(III)	-	+	-
AB(IV)	-	-	-

Определение резус-фактора. На дно сухой пробирки наносят 1 большую каплю универсального реагента анти-резус, затем добавляют такую же каплю исследуемой крови. После встряхивания пробирки производят перемешивание сыворотки анти-резус и крови в течение 5 минут по стенкам пробирки, после чего добавляют 5 — 7 мл физиологического раствора. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

Определение групп крови с помощью цоликлонов. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготовляются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 — 10 мл. Цоликлон анти-А — желтого цвета, анти-В — синего, анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия.

Техника определения групп крови. Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на пластине или планшете, определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 — 25 X.

Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 — 0,03 мл).
Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.
Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 — 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
Интерпретация результатов реакции агглютинации с цоликлонами представлена в табл. 4.

Таблица 4

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
	Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
0(I)	_	_	-
А(II)	+	-	+
В(III)	-	+	+
АВ(IV)	+	+	+

Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) — се отсутствие

При положительном результате реакции агглютинации со всеми гремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую аглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешивают на плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

Определение резус-фактора с помощью цоликлона. В лупку планшета наносят 1 большую каплю цоликлона анти-Д-супер_т рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой крови.

Покачивая планшет, смешивают кровь с цоликлоном. За ходом реакции наблюдают в течение 3 минут. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

StudFiles.ru

Методика определения группы крови с помощью цоликлонов

Различают цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ. Они представляют собой моноклональные антитела, которые продуцируются двумя мышиными гибридомами, принадлежат к иммуноглобулинам класса М и предназначены для определения группы крови человека по системе AB0. Цоликлоны изготавливаются из асцитической жидкости мышей - носителей анти-А и анти-В гибридом, являются строго специфичными и, следовательно, не могут вызывать неспецифическую агглютинацию эритроцитов. Технология приготовления реагента исключает возможность попадания в него патогенных для человека вирусов.

Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти- А и анти-В антител. Цоликлоны выпускают в жидкой форме во флаконах по 5-10 мл. Цоликлоны анти-А подкрашены в красный цвет, анти-В - в синий, анти-АВ не подкрашивают, он остается бесцветным. Срок хранения цоликлонов при температуре +2-8°С составляет два года, вскрытый флакон может храниться при той же температуре в течение одного месяца в закрытом виде.

Условия определения группы крови цоликлонами аналогичны описанным выше способам. На пластинку индивидуальными пипетками, под соответствующими надписями, наносят по одной большой капле (0,1 мл) цоликлонов анти-А, анти-В и анти-АВ. Рядом с каплями размещают по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). Затем проводят смешивание капель отдельными палочками. Наблюдают за ходом реакции в течение трех минут, хотя агглютинация может появиться через три - шесть секунд, но возможна и поздняя реакция агглютинации, при наличии в эритроцитах слабых антигенов А или В.

Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных комочков, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации крови с цоликлонами представлена в таблице 5.

Таблица 5. Определение группы крови с помощью цоликлонов

Результат реакции с цоликлонами	Исследуемая кровь принадлежит к группе
Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
-	-	0(I)
+	-	+	A(II)
-	+	B(III)
+	+	AB(IV)

Оценка результатов исследования:

1. Отсутствие агглютинации во всех каплях свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах нет агглютиногенов А и В, и исследуемая кровь принадлежит к 0(I) группе.

2. Наличие агглютинации в каплях с анти-А и анти-АВ свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеется антиген А и кровь принадлежит к A(II) группе.

3. Наличие агглютинации в каплях с анти-В и анти-АВ свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеется антиген В и кровь принадлежит к В (III) группе.

4. Наличие агглютинации во всех каплях свидетельствует о том, что в исследуемых эритроцитах имеются оба антигена (А и В) и кровь принадлежит к АВ(IV) группе. В таких случаях необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого производят смешивание маленькой капли исследуемой крови с каплей изотонического раствора хлористого натрия (в соотношении 1:10) и, отдельно, проверяется реакция с сывороткой четвертой группы крови. При отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе и в сыворотке четвертой группы можно утверждать, что исследуемая кровь принадлежит к АВ(IV) группе. Проводить отдельно контроль с растворителем цоликлонов не требуется, поскольку в нем нет каких-либо добавок, способных вызвать агглютинацию эритроцитов.

studopedia.ru

Цоликлон

Цоликло́н — это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека. Моноклональные антитела для цоликлонов получают при помощи гибридов, или определенных штаммов бактерий. Бактерии для таких производств получают методами генной инженерии.

Название препаратов происходит от названия института, где изобрели и изготовили эти растворы — Центральный Ордена Ленина Институт переливания крови в Москве, сейчас — Гематологический научный центр Росздрава.

Характеристика и основные свойства Цоликлонов Анти-А, Анти-В и Анти-АВ

Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М, Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом, Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

Техника определения групп крови человека системы АВО с помощью цоликлонов

Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С. 1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ по одной большой капле (0.1 мл) под соответствующими надписями. 2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). 3. Смешайте кровь с реагентом, 4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. 5. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. 6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице:

Цоликлоны на практике применяются для определения групп крови. В настоящее время существует большое количество цоликлонов к разным антигенам, которые предназначены для определения групп крови по различным системам. Наиболее часто используются цоликлоны анти-А (красная жидкость), анти-B (синяя жидкость) и анти-D (прозрачная жидкость). Первые два цоликлона предназначены для определения группы крови по системе AB0, последний — для определения группы крови по системе резус. Кроме того, достаточно распространены в использовании цоликлон анти-А1 (лектин), позволяющий среди носителей А-антигена выбрать популяцию носителей ослабленного А2-антигена (то есть лиц, имеющих А2(II) или А2В(IV) группы крови). Неиспользовние цоликлона анти-А1 чревато неверным результатом для такой категории лиц. (вероятна постановка 0(I) вместо А2(II) и В(III) вместо А2В(IV) групп крови). Цоликлон анти-D имеет 2 модификации: собственно анти-D, используемый во врачебно-диагностической практике в комплексе с 10%-м желатином, и анти-D-супер, позволяющим произвести экспресс-определение резус-фактора (при этом все резус-отрицательные пробы требуют обязательной проверки цоликлоном анти-D, так как возможен вариант носительства ослабленного антигена системы резус.).

Форма выпуска

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме в пластиковых флаконах объёмом 10 мл с капельницей или в стеклянных флаконах объёмом 5 мл. Цоликлон Анти-А — красного цвета, Анти-В — синего и Анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1 %.

Хранение

Срок хранения — 2 года при температуре 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8°С в течение месяца в закрытом виде.

Это заготовка статьи по трансфузиологии. Вы можете помочь проекту, дополнив её.

Литература

Инструкция по применению ЦОЛИКЛОНОВ Анти — А, Анти — В и Анти — АВ диагностических жидких для определения групп крови человека системы АВО (Утверждено Приказом № 2 МЗ РФ от 05.10.2000)

ru.wikipedia.org

2. Определение групп крови

Общие сведения. Успехи трансфузионной терапии тесно связаны с успехами изосерологии — науки об антигенах, антителах и группах крови. К. Ландштейнер, изучая серологические свойства крови, установил, что эритроциты человека содержат антигены человека. Одновременно с этим открытием им была выявлена строго абсолютная закономерность содержания в плазме крови естественных антител: против эритроцитарного антигена у данного человека в плазме никогда не бывает соответствующего плазменного антитела.

На основании этих данных Ландштейнер в 1901 г. ввел понятие о групповой принадлежности крови и разделил всех людей по серологическим особенностям эритроцитов на три группы. В 1907 г. Я. Янский доказал, что у людей закономерно встречаются четыре группы крови.

В 1910 г. предложили назвать антигены эритроцитов человека агглютиногенами А и В, а соответствующие антитела анти А и анти В — агглютининами α и β.

В 1928 г. была принята классификация групп крови по Янскому:0(I), А(II),B(III),AB(IV).

В основе определения групп крови лежит реакция изогемагглютинации, т. е. реакция взаимодействия антител плазмы с соответствующими антигенами эритроцитов, вследствие которой наблюдается склеивание эритроцитов в виде зерен или песчинок.

Агглютиногены и агглютинины крови.

Агглютиногены крови, по структуре полисахариды, локализуются в оболочке клеток крови. В настоящее время в крови человека обнаружено более 100 различных агглютиногенов, которые группируются в антигенные системы: системаABO,Rh-hr,MN, Р, Даффи, Льюис и др.

Оценивая клиническое значение различных агглютиногенов, следует выделить основные: антигены системы АВО и Резус-фактор, которые чаще всего бывают причиной посттрансфузионных осложнений. Поэтому указанные факторы всегда учитываются при переливании крови. Возникновение осложнения при совместимости данных факторов указывает на несовместимость крови донора и реципиента по другим системам. В таких случаях требуется индивидуальный подбор крови донора, который должен производиться в отделении или на станции переливания крови.

Агглютиноген «0» является слабым антигеном и выявляется только специальными сыворотками. Даже при повторном введении его в организм антител к нему практически не образуется.

Агглютининыпредставляют собой гамма-глобулины (иммуноглобулины) плазмы крови. Агглютинины делят на естественные — генетически обусловленные, существующие в течение всей жизни, например антитела анти А и анти В, и иммунные, которые появляются у людей в результате иммунизации чужеродными агглютиногенами, например антитела анти-Резус.

Итак, под группами крови подразумевают определённые различные сочетания взаимосвязанных антигенов (агглютиногенов) эритроцитов и антител (агглютининов) плазмы крови.

В табл. 3. представлены основные агглютиногены и агглютинины системы АВ0, характеризующие серологические особенности каждой из четырёх групп крови.

Таблица 3. Агглютиногены и агглютинины, характерные для каждой группы крови

Группа крови по системе АВ0	Агглютиногены эритроцитов	Агглютинины плазмы
0(I)	0	αβ
А(II)	А	β
В(III)	В	α
AB(IV)	АВ	—

По данным М. А. Умновой (1964), среди населения чаще встречается А(II) группа крови — 37,8%, затем 0(I) — 33,5%, реже В(III) иAB(IV) — 8,2%. Групповые особенности крови человека являются его постоянным признаком; они возникают во внутриутробном периоде развития, сохраняются в течение всей жизни и передаются по наследству.

Если при переливании крови у человека произойдет встреча одноименных агглютиногенов и агглютининов (А и α, В и β), то возникает агглютинация, а затем гемолиз эритроцитов, что является тяжелым осложнением, которое нередко заканчивается летальным (смертельным) исходом.

Система Резус. Учащение переливания крови в период, когда существование групп крови по системе АВ0 уже было известно, но не была еще открыта система «Резус», сопровождалось ростом числа посттрансфузионных осложнений, возникавших, несмотря на переливание крови, совместимой по группам АВ0. Причина этих реакций была определена Ландштейнером и Винером (1937— 1939). Они установили, что введение эритроцитов макак вида «Резус» кроликам сопровождается выработкой у последних антител, которые агглютинируют в 100% случаев эритроциты обезьян «резус».

Ввиду этого, указанные антитела назвали антителами антирезус. Затем было установлено, что сыворотка крови этих кроликов, содержащая антитела антирезус, агглютинирует эритроциты 85% людей белой расы. Эритроциты 15% людей этой расы такой сывороткой не агглютинируются. Из этого сделан вывод, что у 85% людей эритроциты содержат антиген «Резус» (Резус-фактор), свойственный обезьянам «Резус». В настоящее время Резус-фактор принято обозначать символами: Rh(D) или простоD. Позже обратили внимание на то, что женщины с группой 0 (I), родившие мертвый плод, при переливании им крови мужей 0 (I), как правило, дают типичную посттрансфузионную реакцию гемолитического типа. Исследования показали, что эти женщины относились к резус-отрицательному типу и содержали в крови антитела «анти резус», которые вызывали гемолиз переливавшейся им совместимой в групповом отношении крови мужей. Было сделано заключение, что резус-отрицательные женщины могут иммунизироваться эритроцитами их резус-положительного плода, унаследовавшего этот тип крови от резус-положительного отца. Приблизительно в это же время было установлено, что резус-отрицательные люди (мужчины и женщины) могут иммунизироваться резус-положительной кровью, причем способ введения ее в организм не имеет существенного значения.

Антитела против антигенов системы «Резус», в частности антитела анти Резус (антитела анти-D), возникают только в результате иммунизации при переливании резус-несовместимой крови (гемотрансфузий) или при беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом. При этом антигены или эритроциты плода проникают через плацентарный барьер в кровоток матери и вызывают сенсибилизацию ее организма, проявлением которой является выработка антител «анти Резус». При накоплении в определенной концентрации, антитела анти-Dиз кровотока матери поступают в организм плода, фиксируются на его эритроцитах и разрушают (гемолизируют) их. В результате возникает так называемый «резус-конфликт» — частный случай биологического конфликта матери и плода, обусловленный резус-несовместимостью. Следует отметить, что биологический конфликт из-за несовместимости крови матери и плода по группам кровиAB0 (AB0-конфликт) встречается реже и протекает доброкачественнее. Чаще всего, он возникает в комбинации: мать — группа 0 (I) — плод — группа А (II). При этом групповые агглютинины (антитела анти А) разрушают эритроциты плода группы А(II).

Антитела «антирезус» сохраняются, как правило, пожизненно. Титр этих антител может снижаться, но при повторном контакте с антигеном (переливание резус-несовместимой крови или резус-несовместимая беременность) продуцирование их в сенсибилизированном организме резко возрастает.

В России используется двойное обозначение групп крови — 0(I), А(II), В(III) и AB(IV).

Принадлежность человека к той или иной группе крови не зависит от возраста, пола, расовой принадлежности. Группа крови передается по наследству в соответствии с законами генетики. Она является индивидуальной биологической особенностью человека, которая определяется уже в раннем периоде эмбрионального развития и не изменяется в течение всей последующей жизни.

Группа крови системы АВ0 — это определенное сочетание врожденных групповых антигенов эритроцитов, содержащихся в этих клетках крови, и антител к ним, находящихся в плазме (сыворотке).

Вещества, находящиеся в клетках крови, представляют собой антигены (агглютиногены), вызывающие агглютинацию (склеивание) клеток крови при встрече и взаимодействии с одноименными антителами плазмы, получившими название агглютининов. Агглютиногены клеток крови обозначаются латинскими буквами А и В, агглютинины — соответственно греческими буквами α (антитела «анти А») и β (антитела «анти В»). Это нашло отражение в буквенном обозначении групп крови.

Кровь любого человека может одновременно содержать только разноимённые друг другу агглютиногены и агглютинины или не иметь каких-то из них. В противном случае должна произойти агглютинация (склеивание) клеток крови.

В зависимости от сочетания агглютиногенов и агглютининов различают четыре группы крови по системе АВ0— основной и наиболее важной антигенной системе клеток крови человека.

В крови I группыимеется так называемый «нулевой» (0) агглютиноген, агглютиногены А и В отсутствуют. Соответственно в плазме (сыворотке) находятся оба агглютинина — α и β. Полная формула крови I группы — 0αβ(I).

В крови II группыимеются агглютиноген А и агглютинин β. Полная формула II группы крови — Аβ(II).

В кровиIII группыимеются агглютиноген В и агглютинин α. Полная формула III группы крови — Вα(III).

В крови IVгруппы имеются оба агглютиногена — А и В и отсутствуют агглютинины. Полная формула IV группы крови — AB₀(IV).

У 88 % людей с группой крови А(II) определяется разновидность агглютиногена А — А₁, а у 12% имеется агглютиноген А₂. Они отличаются друг от друга по силе агглютиногенной способности. Значительно сильнее она выражена у разновидности А₁. Соответственно, и группа крови AB(IV) также имеет две подгруппы: A₁B(IV) и A₂B(IV). Разделение на подгруппы имеет большое практическое значение при определении группы крови. Не зная этого, можно ошибочно определить группу крови 0(I) - вместо А(II), и В(III) - вместо AB(IV). Это связано с тем, что при наличии слабого агглютиногена А₂агглютинация при определении группы крови наступает поздно (иногда на 4 - 5 минуте) и выражена очень слабо.

Групповая принадлежность крови системы АВ0 определяется реакцией агглютинациипри помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток или цоликлонов (моноклональных антител).

Для определения групп крови применяют иммунную реакцию – реакцию гемагглютинации.Реакция гемагглютинации- склеивание и выпадение в осадок, в виде комочков, эритроцитов (несущих антигены) под действием одноимённых антител сыворотки крови. Групповая агглютинация – специфическая агглютинация клеток, наступающая под действием антител, направленных к групповым антигенам этих клеток. Антигены, участвующие в реакции агглютинации называют агглютиногенами. Антитела, направленные против одноимённых антигенов эритроцитов и обладающие свойством их агглютинировать, называютгемагглютининами(гемагглютинирующими антителами).

Определение группы крови системы АВ0 возможно тремя способами

= При помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток.

= При помощи цоликлонов.

= Перекрёстным способом, т.е. одновременно при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток (или цоликлонов) и стандартных эритроцитов. При этом способе, так же как и при первых двух, определяют наличие или отсутствие эритроцитарных антигенов и, кроме того, врачи–лаборанты (в лаборатории) устанавливают наличие или отсутствие групповых антител в сыворотке исследуемой крови при помощи стандартных эритроцитов

Для проведения иммуносерологических исследований (определение групповой принадлежности крови системы АВ0, Резус – принадлежности, проведение проб на индивидуальную совместимость крови донора и сыворотки реципиента) используют кровь (эритроциты и сыворотку) реципиента не более двухдневного срока хранения при температуре +20…+60 (при условии отсутствия гемолиза в пробирке).

А. Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

Стандартные сыворотки для определения групп крови изготавливаются учреждениями службы крови (отделениями, станциями и институтами переливания крови). Они готовятся из сыворотки крови человека и содержат в различных комбинациях и в достаточном количестве групповые изоагглютинины α и β, которые вступают в реакцию антиген - антитело с антигенами системы АВ0 исследуемых эритроцитов, склеивая (агглютинируя) их.

В нашей стране при определении групп крови обязательно использование стандартных сывороток четырех групп: 0 (I), А (II), В (III),AB(IV). Последняя не содержит групповых изоагглютининов и не должна давать реакции агглютинации (изосерологически нейтральна). Сыворотки окрашены и имеют в перечисленной последовательности следующую цветовую маркировку: бесцветная, синяя, красная, желтая. При нанесении стандартных сывороток на плоскость, где определяется группа крови, необходимо соблюдать такую же последовательность расположения цветов (контроль верности нанесения на плоскость стандартных сывороток). Стандартные сыворотки выпускаются учреждением-изготовителем в герметически закрытых флакончиках (как для инсулина) или ампулах. Этикетка на этих сосудах со стандартной сывороткой имеет надписи: наименование учреждения, выпустившего сыворотку; групповая принадлежность данной сыворотки приведенным выше шифром - 0 (I),A(II) и т. д.; титр антител, количество (обычно по 2-5 мл) сыворотки, дата истечения срока годности; серия, обозначающая порядковый номер изготовления в текущем году. Помимо этого на этикетках нанесены цветные полосы, число и цвет которых соответствуют обозначению групповой принадлежности сыворотки.

Например, сыворотка 0 (I) не окрашена и поэтому полос не имеет, сыворотка А (II) имеет две полосы синего цвета, сыворотка В (III) — три красные и АВ (IV) — четыре желтые полосы. Титром сыворотки считается ее максимальное разведение, при котором невооруженным глазом видна реакция агглютинации; его величина гарантируется учреждением — изготовителем сыворотки.

Определение групп крови производится в хорошо освещенном помещении при температуре +15 ... +25 "С.

Используются любые белые пластинки (тарелки, пластик) со смачиваемой поверхностью (на которых не растекаются капли сывороток) или специальные планшеты. На верхнем крае пишется фамилия и инициалы человека, у которого определяется группа крови. Специальные пластины имеют над лунками обозначения, согласно которым наносятся стандартные сыворотки. На приспособленных для определения группы крови пластинах по верхнему краю слева направо наносят надписи: О (I), А (II), В (III) и при необходимости - АВ (IV). Под соответствующими обозначениями в два ряда наносятся разные серии стандартных сывороток. В верхнем и нижнем рядах одногруппные сыворотки должны быть различных (не совпадающих) серий. То есть, используются по две серии сывороток каждой группы. Каждая сыворотка наносится отдельной пипеткой (чаще всего используют глазные пипетки), поэтому пипетки должны маркироваться (0, А, В, АВ) и находиться только в своих флакончиках (ампулах). Для каждого флакончика сыворотки выделяется отдельная маркированная пипетка, которая после нанесения сыворотки на пластинку сразу же опускается в ту ампулу с сывороткой, из которой была взята. На плоскости, рядом с каплями стандартной сыворотки, палочкой (или уголком предметного стекла) наносятся капельки исследуемой крови; соотношение «сыворотка — кровь» должно быть 10:1. Ориентировочно капля стандартной сыворотки должна быть равна величине копеечной монеты, капелька крови — величине головки портняжной булавки (кровь для исследования может быть взята из пальца, вены, взвеси эритроцитов (со дна пробирки), из запаянной трубки контейнера с гемотрансфузионной средой.

Капля крови должна быть примерно в 10 раз меньше капли стандартной сыворотки (соотношение 1:10), с которой она смешивается сухой стеклянной палочкой (уголком предметного стекла). После размешивания капель в равномерно красный цвет пластинку покачивают, оставляют на 1 —2 мин в покое, а затем снова периодически покачивают. Не ранее чем через 3 мин в капли, в которых наступила агглютинация (невооружённым глазом видны «песчинки», «зёрнышки»), добавляют по 1 капле (0,05 мл) физиологического раствора NaCl. После внесения физиологического раствора ложная агглютинация исчезает, истинная — остается без изменения или усиливается. Хотя агглютинация начинается в течение первых 10 — 30 секунд, наблюдение следует продолжать до истечения 5 минут, после чего делается заключение о группе крови.

Реакция гемагглютинации может быть положительной (наличие агглютинации) или отрицательной (отсутствие агглютинации). Результаты в каплях с сыворотками двух разных серий одной и той же группы крови должны совпадать. Результаты определений могут дать четыре различные комбинации положительных и отрицательных реакций:

1) если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, то исследуемая кровь принадлежит к группе 0(I);

2) если сыворотки групп 0αβ(I) и Вα(III) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Аβ(II) — отрицательную, то исследуемая кровь принадлежит к группе А(II);

3) если сыворотки групп 0αβ(I) и Аβ(II) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вα(III) — отрицательную, то исследуемая кровь принадлежит к группе В(III);

4) если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, для исключения неспецифической агглютинации, необходимо провести дополнительное исследование с сывороткой (одной серии) AB0 (IV). Если реакция с этой сывороткой будет отрицательная, то исследуемая кровь действительно относится к группе AB(IV).

Оценка результатов определения групп крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток приведена в таблице:

Оценка результатов определения групп крови при помощи изогемагглютинирующих сывороток

Группа крови	Сыворотка 0αβ(I) - анти-А+B	Сыворотка Aβ (II) - анти-B	Сыворотка Bα (III) - анти-A	Сыворотка AB0 (IV)
0 (I)	-	-	-	-
А (II)	+	-	+	+
B (III)	+	+	-	+
AB (IV)	+	+	+	-

Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) ее отсутствие.

Ошибки при определении групп крови системы АВОвозникают в результате нарушения инструкции.

Основные причины ошибок:

нарушение порядка нанесения стандартных сывороток, что может привести к неправильной трактовке полученных результатов;
изменение активности или специфичности сывороток вследствие того, что при нанесении их на планшет из флакончиков (ампул) пользуются одной пипеткой или смешивают капли сыворотки и крови одной стеклянной палочкой (одним уголком предметного стекла);
снижение активности сывороток в результате нарушения режима хранения (необходима средняя температура хранения +4...+6 °С);
потеря специфичности вследствие инфицирования или повышение вязкости сывороток от высыхания при хранении их в открытых флакончиках (ампулах);
нарушение пропорции сыворотка — кровь (10:1);
исключение из методики определения групп крови физиологического раствора или стандартной сыворотки АВ (IV) группы;
преждевременный или, наоборот, поздний учет результатов определения групп крови (учет должен производиться по истечении 5 мин с момента перемешивания капель).

StudFiles.ru

Система резус (Rh)

Открыта Ландштейнером, Винером в 1937 – 1940 гг. В настоящее время выделено много антигенов этой системы. Наиболее важными из них являются : Rhо (D); rh' (С) ; rh'' (Е).

Самым активным является антиген D.

Кровь считается резус-положительной (Rh+) если есть агглютиноген D.

У 85% европейцев кровь резус-положительная, у 15% - резус-отрицательная. У монголоидов 100% резус-положительная.

К агглютиногенам системы резус нет врожденных агглютининов. Они вырабатываются в ответ на введение агглютиногена .

Резус-конфликт возникает при следующих ситуациях:

1) повторное переливание резус-отрицательному реципиенту резус-положительной крови;

2)в случаях беременности, когда резус-отрицательная мать вынашивает резус-положительный плод. Попадание в кровь матери даже 0,1 – 0,4\5 мл Rh+ крови плода вызывает выработку антител (антирезус-агглютининов, Rh+- антител). Через плацентарный барьер они попадают в кровь плода и вызывают агглютинацию его эритроцитов с последующим их гемолизом.

Исход такой беременности зависит от титра антител.

Помимо системы АВ0 и Rh-hr существуют другие системы агглютиногенов. Они находятся в эритроцитах независимо от АВ0 и друг от друга.

1.Система Келл – Челлано

2.Система Кидд

3. Система Лютеран

4. Система Даффи

5.Система Диего (У индейцев Ю.Америки).

Все эти системы агглютиногенов имеют значение при частых переливаниях крови или при беременности, несовместимой по какому-то из этих агглютиногенов. Поэтому от одного донора нельзя переливать кровь многократно.

Определение группы крови и резус-фактора методом цоликлонов

В основе лежит наличие или отсутствие агглютинации.

Для определения групп крови используют цоликлоны анти-А и анти В, содержащие агглютинины α и β соответственно.

При добавлении в каплю цоликлона в 10 раз меньшее количество исследуемой крови наблюдают состояние внесенных эритроцитов.

I группа крови не содержит агглютиногенов, поэтому агглютинация (склеивание эритроцитов) не происходит.

II группа крови дает агглютинацию в цоликлоне анти- А,

III в цоликлоне анти-В

IV в анти-А и анти-В

Для определения резуспринадлежности используют цоликлон анти-D. Если кровь резус-положительная наблюдается агглютинация.

Правила переливания крови.

Можно переливать только одногруппную кровь резуссовместимую.

1.Определить группу крови во флаконе и у реципиента;

2.Определить резус-фактор у донора и реципиента;

3.Провести пробу на индивидуальную совместимость. На стекле смешивают каплю сыворотки или плазмы реципиента и кровь донора в соотношении 10 : 1;

4.Проводят пробу на резус-совместимость. В пробирку вносят 2 капли плазмы реципиента, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% полиглюкина. В течение 3 мин перемешивают, затем добавляют 3 – 5 мл физраствора.

5.Проводят трехкратную биологическую пробу: 3 раза по 15 – 20 мл крови донора вливают струйно с интервалом 3 мин.

6.Остальную часть крови переливают капельно или струйно по показаниям.

StudFiles.ru