Определение резуса

Способы определения резус-фактора

Все методы определения резус-фактора делятся на способы, применяемые в клинике: в условиях приемного покоя, в операционной, на отделении у постели больного и т. д., не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.

Способы определения резус-фактора в клинике. Используются два так называемых экспресс-метода: экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева. Экспресс-метод на плоскости без подогрева.

Экспресс-метод определения Rh-фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.

Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца (из вены) непосредственно перед исследованием, или консервированная кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.

Методика проведения реакции

Исследование проводят в центрифужных пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ (IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают но ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген - антитело» и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем одно-двукратного перевертывании пробирки (без взбалтывания!).

Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности.

Лабораторные методы определения резус-фактора

Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода.

Метод агглютинации в солевой среде

Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга.

Метод конглютинации с желатином

В пробирку помещают равные объемы исследуемых эритроцитов, антирезусной сыворотки и 10% раствора желатина. Пробирки инкубируют при температуре 45-48є C, после чего добавляют десятикратный объем физиологического раствора. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинации, видимой невооруженным глазом.

Непрямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса)

Эта реакция является наиболее чувствительной для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечеткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС). При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.

В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты; помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации является показателем того, что исследуемый образец крови резус- положительный. Если агглютинация отсутствует, испытуемая кровь - резус-отрицательная.

Реакция с aнти-D-моноклональными антителами.

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D-моноклональных антител (МКА) и маленькую каплю (0,01мл) исследуемой крови. За реакцией наблюдают в течение 2,5 мин. При смешивании анти-D-МКА образцами резус-положительных эритроцитов отмечается быстрое наступающая лепестковая агглютинация. Если кровь резус-отрицательная - агглютинация отсутствует.

StudFiles.ru

Определение в крови резус-фактора

Определение в крови резус-фактора производится врачами, прошедшими специальную подготовку на СПК и получившими сертификат.

Резус-фактор определяется с помощью стандартной сыворотки, в которой содержатся активные резус-антитела. Эта сыворотка готовится из крови лиц, сенсибилизированных к резус-фактору, это:

• резус-отрицательные женщины, сенсибилизированные к резус-фактору резус-положительным плодом во время беременности;

• доноры, у которых в крови обнаружены резус-антитела;

• лица, специально иммунизированные резус-антигеном;

• лица, перенесшие трансфузионные реакции или осложнения в связи с резус-конфликтом, в крови которых могут содержаться активные резус- антитела.

Готовая антирезусная сыворотка выпускается в ампулах или флаконах по 2-5 мл с наклеенными этикетками, на которых указано учреждение - изготовитель, номер серии, обозначена группа по системе AB0, специфичность, форма резус-антител и срок годности. На этикетках, по диагонали, наносят те же цветные полосы, что и на стандартных гемагглютинирующих сыворотках.

Сывороткой антирезус 0(I) группы определяют резус-фактор только в эритроцитах первой группы, сывороткой антирезус А(II) группы - в эритроцитах первой и второй групп, а сывороткой антирезус В (III) группы в эритроцитах первой и третьей группах крови. Сывороткой антирезус группы АВ(IV), специально приготовленной (универсальной), определяют резус-фактор в эритроцитах группы АВ(IV) и в других группах крови по системе AB0.

При каждом исследовании на резусную принадлежность необходимо ставить контроль для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус. Для контроля применяют стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты первой или той же группы, что и исследуемая кровь.

Кровь для исследования берут, в количестве 5 мл, в обычную пробирку без стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы, группу крови лица, у которого взята кровь, отделение и дату. После свертывания крови на дне образуется сгусток из эритроцитов, которые и следует брать для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сгусток для отделения большего их количества.

Можно брать кровь с изотоническим раствором лимоннокислого натрия (0,25 мл на 1 мл крови), но в этом случае необходимо отмыть эритроциты. Для этого в пробирку доверху наливают изотонический раствор хлористого натрия, хорошо перемешивают и центрифугируют. Отмытые эритроциты берут для исследования.

Стандартные антирезусные сыворотки активны только в определенных условиях, поэтому методика определения резус-фактора этими сыворотками указывается в сопроводительной инструкции. Резус-фактор в крови можно определять следующими способами:

• с помощью универсального реагента в пробирках без подогрева;

• реакцией с применением 10% желатина в пробирках с подогревом (+46- 48°С);

• реакцией агглютинации в солевой среде;

• с помощью цоликлона анти-Д Супер.

На практике чаще пользуются первым способом. Стандартный универсальный реагент представляет собой смесь сыворотки АВ(IV) группы крови и 33% раствора полиглюкина в соотношении 2:1. Его приготавливают на СПК. Универсальный реагент не содержит групповых агглютининов (в сыворотке АВ(IV) группы крови их нет), поэтому он может быть использован для определения резус-антигена Д в эритроцитах любой группы крови системы AB0. Исследованию может подвергаться кровь, взятая из пальца, консервированная кровь и осадок эритроцитов в пробирке с кровью, взятой без стабилизатора, но после образования сгустка.

Методика проведения реакции:

1. В штатив устанавливают два ряда центрифужных пробирок объемом до 10 мл, по количеству образцов эритроцитов. Дополнительно устанавливают еще две пробирки, для контроля реакции с резус- положительными и резус-отрицательными эритроцитами. Попарно, из первого и второго ряда пробирок, производят надписи фамилии и инициалов лиц, у которых исследуют кровь.

2. Во все пробирки первого ряда и в две контрольные пробирки вносят по две капли стандартного универсального реагента-антирезус; во все пробирки второго ряда вносят по две капли изотонического раствора хлористого натрия и по одной капле 33% раствора полиглюкина;

3. В пробирки первого и второго ряда вносят по одной капле исследуемых эритроцитов; в первую контрольную пробирку вносят одну каплю стандартных резус-положительных эритроцитов, во вторую контрольную пробирку - такую же каплю стандартных резус-отрицательных эритроцитов.

4. Пробирки встряхивают, затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального уровня, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки, что делает реакцию более выраженной.

Оценка результатов исследования:

Агглютинация может появиться уже на первой минуте, но ожидать необходимо три минуты, так как реакция может быть замедленной. Через три минуты в пробирки наливают по 2-3 мл изотонического раствора хлористого натрия, перемешивают двух - трехкратным плавным переворачиванием пробирок (не встряхивать!). Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу, выявляя наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов. Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой антирезус, считаются резус-положительными, а не давшие агглютинации - резус-отрицательными.

В контрольных пробирках должна произойти аналогичная реакция - отсутствие агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами и наличие ее со стандартными резус-положительными эритроцитами. В пробирках второго ряда агглютинации быть не должно. Наличие агглютинации указывает на возможность ее появления за счет аутоантител. В таких случаях следует повторить реакцию с эритроцитами, отмытыми в теплом изотоническом растворе хлористого натрия, для удаления с них аутоантител. При сомнительном результате определения резус- принадлежности, следует применить метод агглютинации в солевой среде с использованием сыворотки антирезус, содержащей полные антитела, или провести исследование с цоликлонами анти-Д Супер.

Определение резус-принадлежности крови только по сыворотке анти-Д считается недостаточным. В случаях резус-отрицательной реакции необходимо дополнительное исследование сыворотками, содержащими антитела анти-С и анти-Е. В число резус-отрицательных засчитываются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов. Это особенно важно при обследовании доноров, беременных женщин с подозрением на изосенсибилизацию и некоторых других категорий больных.

Реакция агглютинации на плоскости

с помощью цоликлонов анти-D супер

1. Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.

2. Наносят рядом маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов. Тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой.

3. Через 10-20 секунд мягко покачивают пластинку.

4. Результаты реакции учитывают через 3 минуты после смешивания, несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 секунд.

5. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии - как резус отрицательная.

6. Для определения резус-принадлежности ускоренным методом на плоскости при комнатной температуре могут быть использованы поликлональные сыворотки анти-D с неполными антителами, приготовленные в комбинации с коллоидами (альбумином, полиглюкином).

Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холодильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде.

studopedia.ru

Определение резус-фактора

Исследование крови на резус-принадлежность методом конглютинации проводят с помощью специальных сывороток анти-Rh в лабораторных условиях. Предварительно определяют групповую принадлежность (по системе АВО).

Оснащение: две различные серии стандартных сывороток анти-Rh, соответствующих групповой принадлежности определяемой крови, или совместимые в групповом отношении стандартные отмытые одно групповые резус-положительные и резус- отрицательные эритроциты, чашка Петри, водяная баня, пипетки для сывороток, предметные стекла или стеклянные палочки.

На чашку Петри наносят подряд 3 большие капли сыворотки анти-Rh одной серии и параллельно — 3 капли сыворотки другой серии, получая 2 горизонтальных ряда сывороток Затем в 1 -й вертикальный ряд сывороток обеих серий вносят по небольшой капле исследуемой крови (соотношение сыворотки и крови 10:1 или 5:1), в средний ряд — по такой же капле стандартных резус-положительных эритроцитов (контроль активности), в 3-й ряд — резус-отрицательные стандартные эритроциты (контроль специфичности). Отдельной для каждой капли стеклянной палочкой или углом предметного стекла тщательно перемешивают сыворотку и эритроциты, чашки закрывают крышкой и помешают на водяную баню при температуре 46—48 °С. Спустя 10 мин учитывают результат, просматривая чашку в проходящем свете. В капле со стандартными резус-положительными эритроцитами должна быть агглютинация, с резус-отрицательными — она отсутствует. Если в каплях обеих серий сывороток с исследуемыми эритроцитами определяется агглютинация — кровь резус-положительная, если она отсутствует — кровь резус-отрицательная.

Следует помнить о том, что добавлять изотонический раствор хлорида натрия в каплю сыворотки, как это принято при определении групповой принадлежности крови по системе АВО с помощью стандартных сывороток, категорически запрещено, так как это может нарушить реакцию агглютинации.

Для экспресс-метода определения Rh-фактора используют специальный реагент — сыворотку анти-Rh IV (АВ) группы, разведенную 20—30% раствором альбумина человека или 30—33% раствором полиглюкина, используемого как вешество, способствующее агрегации эритроцитов при комнатной температуре.

Каплю стандартной сыворотки анти-Rh IV (АВ) группы наносят на предметное стекло или чашку Петри и параллельно наносят каплю резус-отрицательной сыворотки ГУ (АВ) группы, не содержащей антител. К ним добавляют в 2—3 раза меньшего объема каплю исследуемой крови, перемешивают углом предметного стекла, стеклянной палочкой или путем покачивания в течение 3—4 мин, после чего добавляют по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия и по истечении 5 мин учитывают реакцию. При наличии агглютинации эритроцитов с сывороткой анти-Rh и отсутствии ее с контрольной сывороткой — кровь резус-положительная, при отсутствии агглютинации с обеими сыворотками — резус-отрицательная. В случае появления агглютинации с обеими сыворотками реакцию следует рассматривать как сомнительную. Для экстренного переливания следует использовать только резус-отрицательную кровь, а при ее отсутствии возможно в опасной для жизни ситуации переливание резус-положительной крови после проведения пробы на совместимость по Rh-фактору.

85. Профилактика ошибок при определении групповой и резус 

studopedia.ru

Техника определения резус-фактора

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить:флакон с антирезусной сывороткой, пипетки;пробирки;изотонический раствор хлорида натрия;исследуемую взятую из вены или пальца кровь, часы; лотки;перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

на дно пробирки поместить каплю антирезусной сыворотки;

сюда же поместить каплю исследуемой крови;

пробирку перевернуть и качательными движениями смешать кровь с сывороткой так, чтобы содержимое растекалось по стенкам. Это ускорит реакцию агглютинации;

при наличии агглютинации через 3 минуты для исключения ложной агглютинации добавить 3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешать путем двукратного перевертывания пробирки. Не взбалтывать!

Оценка результата:

а) при наличии агглютинации – кровь резус-положительная;

б) при отсутствии агглютинации – кровь резус-отрицательная.

Окончание манипуляции:

Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
Вымыть руки, осушить полотенцем.

№ 12

studopedia.ru

Как определить резус-фактор плода?

Вынашивание и рождение ребенка – очень волнующий и серьезный процесс. На протяжении всей беременности специалисты-медики (перинатологи, гинекологи) следят за целым перечнем показателей и оценивают факторы, характеризующие состояние здоровья матери и развивающегося малыша. Одним из таких показателей является резус-фактор плода.

Что такое резус-фактор

Под этим понятием скрывается особый белок, располагающийся на поверхности эритроцитов. У большинства людей (около 85%) этот белок есть, поэтому их называют резус-положительными. У остальных 15% населения планеты этого белка нет. Такие люди считаются резус-отрицательными. Если выражаться другими словами, то резус-фактор – это одна из многих иммунологических характеристик крови, которая не оказывает влияния на состояние здоровья человека.

Когда это важно?

Существуют ситуации, когда знать о своей резус-принадлежности надо обязательно. Во-первых, это важно при возникновении ситуации, когда требуется переливание крови. Во-вторых, подготовка к оперативному вмешательству также предполагает осведомленность в этом вопросе. В-третьих, важно знать резус-принадлежность плода при планировании беременности и рождении ребенка. В этом случае наиболее опасна ситуация, когда будущая мама резус-отрицательна, а развивающийся младенец имеет положительную кровь. Здесь уже имеет смысл говорить о резус-конфликте.

Суть "конфликтной ситуации"

Представим себе, что женщина имеет Rh-отрицательную кровь, а будущий отец резус-положителен. Вероятность развития конфликта в этом случае оценивается как 50 на 50. Это достаточно много, поэтому ситуация должна находиться под жестким контролем специалистов.

При таком варианте у будущих родителей ребенок может унаследовать положительный резус-фактор отца. Через плацентарный барьер эритроциты крови ребенка могут попасть в кровь матери и будут восприняты ее организмом как чужие, что даст толчок ее иммунной системе к выработке антител для уничтожения эритроцитов крови малыша. В тяжелых случаях возникает угроза жизни ребенка, поэтому провести анализ на резус-фактор плода – значит дать шанс малышу родиться здоровым.

Симптоматика

Для чего нужно знать резус-фактор своего будущего ребенка? Проведя все необходимые исследования, будущая мамочка либо полностью исключит возможность развития конфликта, успокоится и будет вынашивать здорового ребенка, либо узнает о существующей проблеме и предпримет все необходимые меры для того, чтобы родить здорового малыша.

Однако для организма взрослой женщины все процессы, связанные с такого рода конфликтом, не несут никакой угрозы или опасности и не имеют никаких симптомов. Тогда как для ребенка эта ситуация может иметь катастрофические последствия.

Грозные признаки наличия проблем с резус-принадлежностью дает возможность увидеть УЗИ плода. Здесь будут видны и скопления жидкости в тех местах, где ее не должно быть, и отечность, и поза ребеночка, которую нельзя назвать естественной (поза Будды).

Скопление больших объемов жидкости приводит к увеличению животика у ребенка, вынуждает его развести ножки в стороны. При проведении УЗИ с высокой долей вероятности будет виден сдвоенный контур детской головки, что свидетельствует о наличии отечности. Не соответствует норме размер плаценты и диаметр вены в пуповине.

Все эти признаки указывают на развитие конфликта между организмами матери и малыша и должны стать побудительным мотивов для того, чтобы выяснить резус-принадлежность развивающегося в утробе ребенка.

Определения резус-фактора ребенка по материнской крови

Современное медицинское оборудование дает возможность выяснить резус-фактор плода уже в первом триместре беременности, начиная с 10 недели.

Суть метода в следующем. У будущей матери производится забор венозной крови. Из нее выделяется ДНК развивающегося в утробе ребенка. Далее эта ДНК исследуется на предмет наличия в ней гена RhD (резус-фактора). Если в процессе изысканий фрагменты резус-фактора обнаруживаются, можно считать что будущий человек резус-положителен. Если таких фрагментов в ДНК ребенка нет – значит, малыш имеет отрицательную резус-принадлежность.

Своевременно произведенное определение резуса плода дает возможность вовремя начать профилактические мероприятия, отодвигающие возникновение резус-конфликтов на более поздние сроки и, как следствие, сводящие к минимуму нанесение вреда здоровью ребенка.

Эта методика считается неинвазивной и не несет никакой угрозы жизни и здоровью матери и ребенка. Однако до недавнего времени узнать резус-фактор плода можно было только с помощью проведения исследования ворсин плаценты или взятой внутриутробно крови у малыша. Эти виды методик (амниоцентез, кордоцентез) считают инвазивными и только строгие медицинские показания могут стать причиной их назначения.

Амниоцентез

Если возникает необходимость выяснить состояние ребенка как можно более точно, встает вопрос о том, как определить резус-фактор плода, специалисты могут предложить амниоцентез, который представляет собой прокол плодного пузыря с целью взятия околоплодных вод для проведения исследований о содержании в них билирубина. Этот показатель с высокой точностью характеризует состояние малыша.

Однако женщине стоит знать, что процедура эта является достаточно опасной. Всегда существует вероятность занесения инфекции в околоплодные воды. Также возможно подтекание жидкости за пределы плодного пузыря, появление кровотечения. Определение резус-фактора плода методом амниоцентеза может спровоцировать отслойку плаценты раньше времени.

Процедура может быть назначена в тех случаях, когда антитела к резус-фактору уже присутствуют в крови матери и их содержание (титр) составляет 1:16 или у этой женщины уже есть ребенок с гемолитической болезнью новорожденных (ГБН) в тяжелой форме.

Кордоцентез

Как узнать резус-фактор плода с помощью этой методики? Суть в том, что в пуповине делается прокол, оттуда производится взятие крови для проведения исследований. С применением этого метода уровень билирубина устанавливается точнее, чем при амниоцентезе. Переливание крови малышу также производится с применением этого способа.

Кордоцентез также является достаточно опасным и может вызвать все осложнения, характерные для амниоцентеза. Кроме того, возможно образование гематомы на пуповине, что в дальнейшем может нарушить нормальный обмен веществ между организмами матери и младенца.

Определение резус-фактора плода с применение кордоцентеза обычно назначается при содержании антител в пропорции 1:32, наличии детей, больных ГБН или умерших от последствий резус-конфликта.

Возможно ли лечение резус-конфликтов у беременных

Лечение, конечно же, возможно. Однако самым действенным методом, дающим наиболее эффективный результат, является переливание крови ребенку. Процедура среди специалистов считается очень рискованной, но значительно улучшает состояние будущего человека, и с высокой степенью вероятности дает возможность избежать преждевременного родоразрешения.

Ранее были популярными другие методики лечения, которые тем не менее не давали явного терапевтического эффекта и считались мало- или совсем неэффективными. К таким способам можно отнести пересадку кожи от мужа будущей матери, плазмоферез и т.п.

В любом случае, если резус-фактор плода и его матери дает возможность поставить диагноз резус-конфликта, самым действенным вариантом благополучного завершения беременности и рождения здорового малыша будет нахождение под контролем специалистов-медиков и выполнение всех их указаний и назначений.

Резус-конфликт и родоразрешение

Когда вопрос о том, как определить резус-фактор плода, решен, и наличие конфликта в организме матери установлено, большое значение при протекании беременности имеет временной фактор. Специалисты говорят, что чем раньше это произошло, тем с большими проблемами и осложнениями будет протекать беременность.

Причина этого явления в том, что эффект от резус-конфликта с течением времени накапливается. Поэтому в основной массе случаев такую беременность специалисты рекомендуют заканчивать плановыми преждевременными родами.

Медики всеми доступными способами следят за состоянием ребенка и на основании полученной информации принимают решение о том, необходимо ли сохранение беременности или малышу безопаснее родиться чуть раньше времени. Естественные роды в таких ситуациях возможны только в том случае, если ребенок находится в удовлетворительном состоянии и никаких других осложнений нет. В процессе развивающейся родовой деятельности врачи ведут мониторинг жизненно важных характеристик состояния малыша и если появляются какие-либо факторы, осложняющие роды, принимается решение о проведении операции кесарева сечения. Для данной конкретной проблемы такой вариант родоразрешения считается наиболее щадящим.

fb.ru