Способы определения резус-фактора
Все методы определения резус-фактора делятся на способы, применяемые в клинике: в условиях приемного покоя, в операционной, на отделении у постели больного и т. д., не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.
Способы определения резус-фактора в клинике. Используются два так называемых экспресс-метода: экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева. Экспресс-метод на плоскости без подогрева.
Экспресс-метод определения Rh-фактора стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева.
Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца (из вены) непосредственно перед исследованием, или консервированная кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.
Методика проведения реакции
Исследование проводят в центрифужных пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ (IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем в нее добавляют одну каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают но ее внутренней поверхности таким образом, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой. Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса «антиген - антитело» и четкой агглютинации наблюдать следует не менее 3 минут. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем одно-двукратного перевертывании пробирки (без взбалтывания!).
Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности.
Лабораторные методы определения резус-фактора
Для определения резус-принадлежности крови больного в условиях лаборатории применяют четыре основных метода.
-
Метод агглютинации в солевой среде
Используют специальные сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего осадок эритроцитов на дне пробирки рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh+) осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном (Rh-) осадок размещается равномерным слоем и имеет вид правильно очерченного круга.
-
Метод конглютинации с желатином
В пробирку помещают равные объемы исследуемых эритроцитов, антирезусной сыворотки и 10% раствора желатина. Пробирки инкубируют при температуре 45-48є C, после чего добавляют десятикратный объем физиологического раствора. Пробирки 2-3 раза переворачивают и учитывают результат по наличию агглютинации, видимой невооруженным глазом.
-
Непрямой антиглобулиновый тест (реакция Кумбса)
Эта реакция является наиболее чувствительной для выявления неполных антител к ауто- и изоантигенам эритроцитов. К ней, как правило, прибегают при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечеткими результатами, полученными при других методах исследования. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки (АГС). При обработке резус-положительных эритроцитов неполными антителами анти-Rh наступает их обволакивание (сенсибилизация) по отношению к АГС, которая и агглютинирует сенсибилизированные эритроциты, поскольку имеет антитела к глобулинам.
В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физиологическим раствором эритроциты; помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С, после чего эритроциты тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси эритроцитов смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации является показателем того, что исследуемый образец крови резус- положительный. Если агглютинация отсутствует, испытуемая кровь - резус-отрицательная.
-
Реакция с aнти-D-моноклональными антителами.
На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D-моноклональных антител (МКА) и маленькую каплю (0,01мл) исследуемой крови. За реакцией наблюдают в течение 2,5 мин. При смешивании анти-D-МКА образцами резус-положительных эритроцитов отмечается быстрое наступающая лепестковая агглютинация. Если кровь резус-отрицательная - агглютинация отсутствует.
StudFiles.ru
Определение в крови резус-фактора
Определение в крови резус-фактора производится врачами, прошедшими специальную подготовку на СПК и получившими сертификат.
Резус-фактор определяется с помощью стандартной сыворотки, в которой содержатся активные резус-антитела. Эта сыворотка готовится из крови лиц, сенсибилизированных к резус-фактору, это:
• резус-отрицательные женщины, сенсибилизированные к резус-фактору резус-положительным плодом во время беременности;
• доноры, у которых в крови обнаружены резус-антитела;
• лица, специально иммунизированные резус-антигеном;
• лица, перенесшие трансфузионные реакции или осложнения в связи с резус-конфликтом, в крови которых могут содержаться активные резус- антитела.
Готовая антирезусная сыворотка выпускается в ампулах или флаконах по 2-5 мл с наклеенными этикетками, на которых указано учреждение - изготовитель, номер серии, обозначена группа по системе AB0, специфичность, форма резус-антител и срок годности. На этикетках, по диагонали, наносят те же цветные полосы, что и на стандартных гемагглютинирующих сыворотках.
Сывороткой антирезус 0(I) группы определяют резус-фактор только в эритроцитах первой группы, сывороткой антирезус А(II) группы - в эритроцитах первой и второй групп, а сывороткой антирезус В (III) группы в эритроцитах первой и третьей группах крови. Сывороткой антирезус группы АВ(IV), специально приготовленной (универсальной), определяют резус-фактор в эритроцитах группы АВ(IV) и в других группах крови по системе AB0.
При каждом исследовании на резусную принадлежность необходимо ставить контроль для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус. Для контроля применяют стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты первой или той же группы, что и исследуемая кровь.
Кровь для исследования берут, в количестве 5 мл, в обычную пробирку без стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы, группу крови лица, у которого взята кровь, отделение и дату. После свертывания крови на дне образуется сгусток из эритроцитов, которые и следует брать для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сгусток для отделения большего их количества.
Можно брать кровь с изотоническим раствором лимоннокислого натрия (0,25 мл на 1 мл крови), но в этом случае необходимо отмыть эритроциты. Для этого в пробирку доверху наливают изотонический раствор хлористого натрия, хорошо перемешивают и центрифугируют. Отмытые эритроциты берут для исследования.
Стандартные антирезусные сыворотки активны только в определенных условиях, поэтому методика определения резус-фактора этими сыворотками указывается в сопроводительной инструкции. Резус-фактор в крови можно определять следующими способами:
• с помощью универсального реагента в пробирках без подогрева;
• реакцией с применением 10% желатина в пробирках с подогревом (+46- 48°С);
• реакцией агглютинации в солевой среде;
• с помощью цоликлона анти-Д Супер.
На практике чаще пользуются первым способом. Стандартный универсальный реагент представляет собой смесь сыворотки АВ(IV) группы крови и 33% раствора полиглюкина в соотношении 2:1. Его приготавливают на СПК. Универсальный реагент не содержит групповых агглютининов (в сыворотке АВ(IV) группы крови их нет), поэтому он может быть использован для определения резус-антигена Д в эритроцитах любой группы крови системы AB0. Исследованию может подвергаться кровь, взятая из пальца, консервированная кровь и осадок эритроцитов в пробирке с кровью, взятой без стабилизатора, но после образования сгустка.
Методика проведения реакции:
1. В штатив устанавливают два ряда центрифужных пробирок объемом до 10 мл, по количеству образцов эритроцитов. Дополнительно устанавливают еще две пробирки, для контроля реакции с резус- положительными и резус-отрицательными эритроцитами. Попарно, из первого и второго ряда пробирок, производят надписи фамилии и инициалов лиц, у которых исследуют кровь.
2. Во все пробирки первого ряда и в две контрольные пробирки вносят по две капли стандартного универсального реагента-антирезус; во все пробирки второго ряда вносят по две капли изотонического раствора хлористого натрия и по одной капле 33% раствора полиглюкина;
3. В пробирки первого и второго ряда вносят по одной капле исследуемых эритроцитов; в первую контрольную пробирку вносят одну каплю стандартных резус-положительных эритроцитов, во вторую контрольную пробирку - такую же каплю стандартных резус-отрицательных эритроцитов.
4. Пробирки встряхивают, затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального уровня, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки, что делает реакцию более выраженной.
Оценка результатов исследования:
Агглютинация может появиться уже на первой минуте, но ожидать необходимо три минуты, так как реакция может быть замедленной. Через три минуты в пробирки наливают по 2-3 мл изотонического раствора хлористого натрия, перемешивают двух - трехкратным плавным переворачиванием пробирок (не встряхивать!). Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу, выявляя наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов. Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой антирезус, считаются резус-положительными, а не давшие агглютинации - резус-отрицательными.
В контрольных пробирках должна произойти аналогичная реакция - отсутствие агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами и наличие ее со стандартными резус-положительными эритроцитами. В пробирках второго ряда агглютинации быть не должно. Наличие агглютинации указывает на возможность ее появления за счет аутоантител. В таких случаях следует повторить реакцию с эритроцитами, отмытыми в теплом изотоническом растворе хлористого натрия, для удаления с них аутоантител. При сомнительном результате определения резус- принадлежности, следует применить метод агглютинации в солевой среде с использованием сыворотки антирезус, содержащей полные антитела, или провести исследование с цоликлонами анти-Д Супер.
Определение резус-принадлежности крови только по сыворотке анти-Д считается недостаточным. В случаях резус-отрицательной реакции необходимо дополнительное исследование сыворотками, содержащими антитела анти-С и анти-Е. В число резус-отрицательных засчитываются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов. Это особенно важно при обследовании доноров, беременных женщин с подозрением на изосенсибилизацию и некоторых других категорий больных.
Реакция агглютинации на плоскости
с помощью цоликлонов анти-D супер
1. Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.
2. Наносят рядом маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов. Тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой.
3. Через 10-20 секунд мягко покачивают пластинку.
4. Результаты реакции учитывают через 3 минуты после смешивания, несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 секунд.
5. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии - как резус отрицательная.
6. Для определения резус-принадлежности ускоренным методом на плоскости при комнатной температуре могут быть использованы поликлональные сыворотки анти-D с неполными антителами, приготовленные в комбинации с коллоидами (альбумином, полиглюкином).
Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холодильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде.
studopedia.ru
Определение резус-фактора
Исследование крови на резус-принадлежность методом конглютинации проводят с помощью специальных сывороток анти-Rh в лабораторных условиях. Предварительно определяют групповую принадлежность (по системе АВО).
Оснащение: две различные серии стандартных сывороток анти-Rh, соответствующих групповой принадлежности определяемой крови, или совместимые в групповом отношении стандартные отмытые одно групповые резус-положительные и резус- отрицательные эритроциты, чашка Петри, водяная баня, пипетки для сывороток, предметные стекла или стеклянные палочки.
На чашку Петри наносят подряд 3 большие капли сыворотки анти-Rh одной серии и параллельно — 3 капли сыворотки другой серии, получая 2 горизонтальных ряда сывороток Затем в 1 -й вертикальный ряд сывороток обеих серий вносят по небольшой капле исследуемой крови (соотношение сыворотки и крови 10:1 или 5:1), в средний ряд — по такой же капле стандартных резус-положительных эритроцитов (контроль активности), в 3-й ряд — резус-отрицательные стандартные эритроциты (контроль специфичности). Отдельной для каждой капли стеклянной палочкой или углом предметного стекла тщательно перемешивают сыворотку и эритроциты, чашки закрывают крышкой и помешают на водяную баню при температуре 46—48 °С. Спустя 10 мин учитывают результат, просматривая чашку в проходящем свете. В капле со стандартными резус-положительными эритроцитами должна быть агглютинация, с резус-отрицательными — она отсутствует. Если в каплях обеих серий сывороток с исследуемыми эритроцитами определяется агглютинация — кровь резус-положительная, если она отсутствует — кровь резус-отрицательная.
Следует помнить о том, что добавлять изотонический раствор хлорида натрия в каплю сыворотки, как это принято при определении групповой принадлежности крови по системе АВО с помощью стандартных сывороток, категорически запрещено, так как это может нарушить реакцию агглютинации.
Для экспресс-метода определения Rh-фактора используют специальный реагент — сыворотку анти-Rh IV (АВ) группы, разведенную 20—30% раствором альбумина человека или 30—33% раствором полиглюкина, используемого как вешество, способствующее агрегации эритроцитов при комнатной температуре.
Каплю стандартной сыворотки анти-Rh IV (АВ) группы наносят на предметное стекло или чашку Петри и параллельно наносят каплю резус-отрицательной сыворотки ГУ (АВ) группы, не содержащей антител. К ним добавляют в 2—3 раза меньшего объема каплю исследуемой крови, перемешивают углом предметного стекла, стеклянной палочкой или путем покачивания в течение 3—4 мин, после чего добавляют по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия и по истечении 5 мин учитывают реакцию. При наличии агглютинации эритроцитов с сывороткой анти-Rh и отсутствии ее с контрольной сывороткой — кровь резус-положительная, при отсутствии агглютинации с обеими сыворотками — резус-отрицательная. В случае появления агглютинации с обеими сыворотками реакцию следует рассматривать как сомнительную. Для экстренного переливания следует использовать только резус-отрицательную кровь, а при ее отсутствии возможно в опасной для жизни ситуации переливание резус-положительной крови после проведения пробы на совместимость по Rh-фактору.
85. Профилактика ошибок при определении групповой и резус
studopedia.ru
Техника определения резус-фактора
Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.
Приготовить:флакон с антирезусной сывороткой, пипетки;пробирки;изотонический раствор хлорида натрия;исследуемую взятую из вены или пальца кровь, часы; лотки;перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.
Подготовка к манипуляции:
- Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
- Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.
Выполнение манипуляции:
на дно пробирки поместить каплю антирезусной сыворотки;
сюда же поместить каплю исследуемой крови;
пробирку перевернуть и качательными движениями смешать кровь с сывороткой так, чтобы содержимое растекалось по стенкам. Это ускорит реакцию агглютинации;
при наличии агглютинации через 3 минуты для исключения ложной агглютинации добавить 3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешать путем двукратного перевертывания пробирки. Не взбалтывать!
Оценка результата:
а) при наличии агглютинации – кровь резус-положительная;
б) при отсутствии агглютинации – кровь резус-отрицательная.
Окончание манипуляции:
- Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
- Вымыть руки, осушить полотенцем.
№ 12
studopedia.ru
Как определить резус-фактор плода?
Вынашивание и рождение ребенка – очень волнующий и серьезный процесс. На протяжении всей беременности специалисты-медики (перинатологи, гинекологи) следят за целым перечнем показателей и оценивают факторы, характеризующие состояние здоровья матери и развивающегося малыша. Одним из таких показателей является резус-фактор плода.
Что такое резус-фактор
Под этим понятием скрывается особый белок, располагающийся на поверхности эритроцитов. У большинства людей (около 85%) этот белок есть, поэтому их называют резус-положительными. У остальных 15% населения планеты этого белка нет. Такие люди считаются резус-отрицательными. Если выражаться другими словами, то резус-фактор – это одна из многих иммунологических характеристик крови, которая не оказывает влияния на состояние здоровья человека.
Когда это важно?
Существуют ситуации, когда знать о своей резус-принадлежности надо обязательно. Во-первых, это важно при возникновении ситуации, когда требуется переливание крови. Во-вторых, подготовка к оперативному вмешательству также предполагает осведомленность в этом вопросе. В-третьих, важно знать резус-принадлежность плода при планировании беременности и рождении ребенка. В этом случае наиболее опасна ситуация, когда будущая мама резус-отрицательна, а развивающийся младенец имеет положительную кровь. Здесь уже имеет смысл говорить о резус-конфликте.
Суть "конфликтной ситуации"
Представим себе, что женщина имеет Rh-отрицательную кровь, а будущий отец резус-положителен. Вероятность развития конфликта в этом случае оценивается как 50 на 50. Это достаточно много, поэтому ситуация должна находиться под жестким контролем специалистов.
При таком варианте у будущих родителей ребенок может унаследовать положительный резус-фактор отца. Через плацентарный барьер эритроциты крови ребенка могут попасть в кровь матери и будут восприняты ее организмом как чужие, что даст толчок ее иммунной системе к выработке антител для уничтожения эритроцитов крови малыша. В тяжелых случаях возникает угроза жизни ребенка, поэтому провести анализ на резус-фактор плода – значит дать шанс малышу родиться здоровым.
Симптоматика
Для чего нужно знать резус-фактор своего будущего ребенка? Проведя все необходимые исследования, будущая мамочка либо полностью исключит возможность развития конфликта, успокоится и будет вынашивать здорового ребенка, либо узнает о существующей проблеме и предпримет все необходимые меры для того, чтобы родить здорового малыша.
Однако для организма взрослой женщины все процессы, связанные с такого рода конфликтом, не несут никакой угрозы или опасности и не имеют никаких симптомов. Тогда как для ребенка эта ситуация может иметь катастрофические последствия.
Грозные признаки наличия проблем с резус-принадлежностью дает возможность увидеть УЗИ плода. Здесь будут видны и скопления жидкости в тех местах, где ее не должно быть, и отечность, и поза ребеночка, которую нельзя назвать естественной (поза Будды).
Скопление больших объемов жидкости приводит к увеличению животика у ребенка, вынуждает его развести ножки в стороны. При проведении УЗИ с высокой долей вероятности будет виден сдвоенный контур детской головки, что свидетельствует о наличии отечности. Не соответствует норме размер плаценты и диаметр вены в пуповине.
Все эти признаки указывают на развитие конфликта между организмами матери и малыша и должны стать побудительным мотивов для того, чтобы выяснить резус-принадлежность развивающегося в утробе ребенка.
Определения резус-фактора ребенка по материнской крови
Современное медицинское оборудование дает возможность выяснить резус-фактор плода уже в первом триместре беременности, начиная с 10 недели.
Суть метода в следующем. У будущей матери производится забор венозной крови. Из нее выделяется ДНК развивающегося в утробе ребенка. Далее эта ДНК исследуется на предмет наличия в ней гена RhD (резус-фактора). Если в процессе изысканий фрагменты резус-фактора обнаруживаются, можно считать что будущий человек резус-положителен. Если таких фрагментов в ДНК ребенка нет – значит, малыш имеет отрицательную резус-принадлежность.
Своевременно произведенное определение резуса плода дает возможность вовремя начать профилактические мероприятия, отодвигающие возникновение резус-конфликтов на более поздние сроки и, как следствие, сводящие к минимуму нанесение вреда здоровью ребенка.
Эта методика считается неинвазивной и не несет никакой угрозы жизни и здоровью матери и ребенка. Однако до недавнего времени узнать резус-фактор плода можно было только с помощью проведения исследования ворсин плаценты или взятой внутриутробно крови у малыша. Эти виды методик (амниоцентез, кордоцентез) считают инвазивными и только строгие медицинские показания могут стать причиной их назначения.
Амниоцентез
Если возникает необходимость выяснить состояние ребенка как можно более точно, встает вопрос о том, как определить резус-фактор плода, специалисты могут предложить амниоцентез, который представляет собой прокол плодного пузыря с целью взятия околоплодных вод для проведения исследований о содержании в них билирубина. Этот показатель с высокой точностью характеризует состояние малыша.
Однако женщине стоит знать, что процедура эта является достаточно опасной. Всегда существует вероятность занесения инфекции в околоплодные воды. Также возможно подтекание жидкости за пределы плодного пузыря, появление кровотечения. Определение резус-фактора плода методом амниоцентеза может спровоцировать отслойку плаценты раньше времени.
Процедура может быть назначена в тех случаях, когда антитела к резус-фактору уже присутствуют в крови матери и их содержание (титр) составляет 1:16 или у этой женщины уже есть ребенок с гемолитической болезнью новорожденных (ГБН) в тяжелой форме.
Кордоцентез
Как узнать резус-фактор плода с помощью этой методики? Суть в том, что в пуповине делается прокол, оттуда производится взятие крови для проведения исследований. С применением этого метода уровень билирубина устанавливается точнее, чем при амниоцентезе. Переливание крови малышу также производится с применением этого способа.
Кордоцентез также является достаточно опасным и может вызвать все осложнения, характерные для амниоцентеза. Кроме того, возможно образование гематомы на пуповине, что в дальнейшем может нарушить нормальный обмен веществ между организмами матери и младенца.
Определение резус-фактора плода с применение кордоцентеза обычно назначается при содержании антител в пропорции 1:32, наличии детей, больных ГБН или умерших от последствий резус-конфликта.
Возможно ли лечение резус-конфликтов у беременных
Лечение, конечно же, возможно. Однако самым действенным методом, дающим наиболее эффективный результат, является переливание крови ребенку. Процедура среди специалистов считается очень рискованной, но значительно улучшает состояние будущего человека, и с высокой степенью вероятности дает возможность избежать преждевременного родоразрешения.
Ранее были популярными другие методики лечения, которые тем не менее не давали явного терапевтического эффекта и считались мало- или совсем неэффективными. К таким способам можно отнести пересадку кожи от мужа будущей матери, плазмоферез и т.п.
В любом случае, если резус-фактор плода и его матери дает возможность поставить диагноз резус-конфликта, самым действенным вариантом благополучного завершения беременности и рождения здорового малыша будет нахождение под контролем специалистов-медиков и выполнение всех их указаний и назначений.
Резус-конфликт и родоразрешение
Когда вопрос о том, как определить резус-фактор плода, решен, и наличие конфликта в организме матери установлено, большое значение при протекании беременности имеет временной фактор. Специалисты говорят, что чем раньше это произошло, тем с большими проблемами и осложнениями будет протекать беременность.
Причина этого явления в том, что эффект от резус-конфликта с течением времени накапливается. Поэтому в основной массе случаев такую беременность специалисты рекомендуют заканчивать плановыми преждевременными родами.
Медики всеми доступными способами следят за состоянием ребенка и на основании полученной информации принимают решение о том, необходимо ли сохранение беременности или малышу безопаснее родиться чуть раньше времени. Естественные роды в таких ситуациях возможны только в том случае, если ребенок находится в удовлетворительном состоянии и никаких других осложнений нет. В процессе развивающейся родовой деятельности врачи ведут мониторинг жизненно важных характеристик состояния малыша и если появляются какие-либо факторы, осложняющие роды, принимается решение о проведении операции кесарева сечения. Для данной конкретной проблемы такой вариант родоразрешения считается наиболее щадящим.
fb.ru
Читайте также
Акт определение
Что означает резус фактор крови
Болезнь определение
Определение высоты объекта
Легальное определение юридического лица дано
Деталь определение
Закон джоуля ленца формула и определение
Двигатель определение
Машина определение
Места массового скопления людей определение
Определение цены деления шприца
Определение надежности