Техника определения группы крови

Техника определения группы крови системы АВ0 стандартными сыворотками

Показания:необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить:стандартную тарелочку с углублениями;набор стеклянных палочек;изотонический раствор хлорида натрия;набор гемагглютинирующих сывороток 1,2,3,4 групп двух серий;пипетки;исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки;перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

на белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

с помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

по мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом – обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 – 25 0С.

№ 11

studopedia.ru

Определение группы крови в системе АВО

Для предотвращения осложнений при переливании крови вследствие реакции агглютинации необходимо предварительно определять группу крови человека.

Цель работы: определить группы крови в системе АВО (с помощью цоликлонов).

Оснащение: цоликлоны, стерильный скарификатор, две стеклянные палочки, стандартные сыворотки групп I, II, III; кафельная белая плитка, вата, спирт, йод, эфир. Объект исследования — человек.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины (антитела).

На кафельную плитку наносят, не смешивая, по одной капле стандартных сывороток I, II и III групп, содержащих соответственно следующие агглютинины: I-α и β, II-β и III - α. Затем, получив каплю крови из пальца, первой стеклянной палочкой переносят небольшое количество её в каплю сыворотки I группы, вторым чистым концом этой же палочки такое же количество крови переносят в сыворотку II группы. При помощи второй стеклянной палочки третью каплю исследуемой крови переносят в сыворотку III группы. Каждый раз кровь тщательно размешивают в капле сыворотки, пока смесь не станет равномерно розоватого цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля утрачивает гомогенность и становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации.

1. Если агглютинации нет во всех трёх каплях, это свидетельствует об отсутствии агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови и, следовательно, она принадлежит I (0) группе.

2. Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащими соответственно агглютинины α + β и α, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит II (А) группе.

3. Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащими агглютинины α + β и β, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и она принадлежит III (В) группе.

4. Если агглютинация произошла с сыворотками I, II и III групп, содержащими соответственно α + β, β и α агглютинины, то эритроциты исследуемой крови содержат как агглютиноген А, так и агглютиноген В. Следовательно, исследуемая кровь принадлежит IV (АВ) группе.

В последнее время определение групп крови человека системы АВО проводят с помощью цоликлонов Анти-А и Анти-В (антитела моноклональные Анти-А и Анти-В), которые применяют или взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками. Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

Таблица 1. Оценка результатов определения групп крови с применением цоликлонов

Результаты реакции с цоликлоном	Группа крови
Анти-А	Анти-В
-	0 (1)
+	-	А (II)
-	+	В(III)
+	АВ (IV)

Проведение работы. Нанесите на пластину индивидуальными пипетками цоликлоны Анти-А и Анти-В по одной большой капле. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови. Наблюдайте за ходом реакции с цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет.

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации.

Оформление протокола. Запишите, к какой группе крови принадлежит ваша кровь. Определите: реципиентам с какими группами крови можно переливать вашу кровь и кровь какой группы можно переливать вам?

Ситуационные задачи для определения конечного уровня знаний студентов:

Задача№1

При длительном голодании у людей появляются так называемые голодные отёки. В чём причина?

Задача №2

Человек съел недоброкачественную пищу. Через некоторое время у него обнаруживается повышение вязкости в крови. Чем можно объяснить это?

Задача№3

При исследовании крови обнаружено, что 80% гемоглобина составляет фетальный гемоглобин. Кому принадлежит кровь?

Задача №4

При подсчёте в больших квадратах камеры Горяева оказалось 580 эритроцитов. Сколько их содержится в 1мл крови, если кровь в меланжер набиралась до метки 0,5?

Задача №5

В 25 больших квадратах камеры Горяева оказалось 100 лейкоцитов. Сколько их содержится в 1мм3 крови, если она набиралась в меланжер до метки 0,5?

Задача №6

В 1мм3 крови содержится 6млн. эритроцитов. Сколько всего их в циркулирующей крови, если 20% всей крови находится в кровяном депо? Вес тела принять за 80кг.

Задача №7

В результате переливания несовместимой группы крови произойдет склеивание эритроцитов, что в дальнейшем приведет к гемолизу. Назовите вид гемолиза?

Задача №8

Почему женщинам запрещено работать на производстве с высоким уровнем вибрации, водить большегрузные машины и т.д.?

Задача №9

В чём причина увеличения билирубина в крови при отравлении уксусной кислотой?

Задача №10

Кровь отца резус-положительная, матери резус-отрицательная, первая беременность. Существует ли опасность резус-конфликта матери и плода, если плод имеет резус-положительную кровь?

Задача №11

Отец имеет резус-отрицательную кровь, мать – резус-положительную. У плода резус-фактора нет. Существует ли опасность резус-конфликта между плодом и матерью?

Задача №12

Почему при остром психическом стрессе может произойти инфаркт миокарда?

Задача №13

Свёртывание крови представляет собой сложный многокомпонентный «каскадный» ферментативный процесс. Нормальное протекание каждой предшествующей фазы обеспечивает развитие и завершение каждой последующей. Что происходит в первую, вторую и третью фазы коагуляционного гемостаза? Что включает послефаза гемокоагуляции?

Задача №14

Для нормального протекания свёртывания крови необходим ряд факторов: протромбин, тромбопластин, АС – глобулин, ионизированный кальций, проконвертин и др. Назовите фактор, участие которого необходимо для протекания всех фаз гемокоагуляции. Какой фактор обеспечивает превращение растворимого фибрин – полимера в нерастворимый фибрин? Где образуется протромбин? Какие факторы принимают участие в образование плазменной и тканевой протромбиназ?

studopedia.ru

23. Определение группы крови.

19.Классификация хронической ишемии по Фонтейну-Леришу-Покровскому

Классификация Фонтейна—Лериша—Покровского основана на выделении в развитии хронической артериальной недостаточности (ХАН) или недостаточности артериального кровообращения нижних конечностей нескольких стадий: Стадия I — бессимптомное атеросклеро-тическое поражение артерий, выявляемое только при инструментальном исследовании. Стадия II — артериальная недостаточ ность, возникающая при функциональной нагрузке (ПХ). Стадия IIА — ПХ на большой дистанции (> 200 м). Стадия НБ — ПХ на малой дистанции (< 200 м). Стадия III — артериальная недостаточность в покое (ишемия покоя). Стадия IV — трофические нарушения, некроз тканей. Важную роль сыграло выделение такого понятия, как критическая ишемия конечности (КИК), которое объединяет больных сХАНШиГУстадий [Дедов И. И. и др., 1998]. Смысл выделения этой группы больных заключается в том, что без своевременного восстановления кровотока ишемия практически неизбежно приведет у них к обширному некрозу тканей и ампутации. Согласно определению КИК от 1997 г., этот диагноз ставят при наличии одного из проявлений: 1. Ишемическая боль покоя в сочетании с АД < 40 мм рт. ст. на тибиальной артерии в положении лежа, на артерии большого пальца стопы — менее 30 мм рт. ст., отсутствием пульсовой волны или ее сглаженность при УЗДГ. 2. Некроз тканей (язва или гангрена) на фоне диффузной ишемии стопы в сочетании с АД < 60 мм рт. ст. на тибиаль ной артерии в положении лежа, на артерии большого пальца стопы — менее 40 мм рт. ст3., отсутствием пульсовой волны или ее сглаженностью при УЗДГ.

22.Трансплантация- операция по замещению органа или тканей пациента соответствующими структурами, удалёнными из другого организма.

Трансплантация состоит из двух этапов: забора органа из организма донора и имплантации его в организм реципиента. Трансплантация органов и (или) тканей может быть осуществлена только в том случае, когда другие медицинские средства не могут гарантировать сохранения жизни реципиента или восстановления его здоровья. Объектами трансплантации могут быть сердце, почки, лёгкое, печень, костный мозг и другие органы; их перечень утверждён Министерством здравоохранения . При трансплантации органов оптимально совпадение группы крови донора и реципиента по системе АВ0. Допустимо также несовпадение по системе АВ0, но по следующим правилам (напоминают правило Оттенберга при гемотрансфузии):

• если у реципиента группа крови 0(I), возможна пересадка только от донора с группой 0(I);

• если у реципиента группа крови A(II), возможна пересадка только от донора с группой A(II);

• если у реципиента группа крови В(III), возможна пересадка от донора с группой 0(I) и В(Ш);

• если у реципиента группа крови АВ(IV), возможна пересадка от донора с группой A(II), В(III) и AB(IV).

Совместимость по резус-фактору между донором и реципиентом учитывают индивидуально для трансплантации сердца и комплекса «сердце-лёгкие» при проведении искусственного кровообращения и использовании гемотрансфузии.

Основы иммуносупрессии

Для снижения активности иммунной системы и профилактики отторжения органов после операций трансплантации всем больным проводят фармакологическую иммуносупрессию. При неосложнён- ном течении используют относительно небольшие дозы препаратов по специальным схемам. При развитии криза отторжения дозы иммунодепрессантов значительно увеличивают, изменяют их комбинацию. Следует помнить о том, что иммунодепрессия приводит к значительному увеличению риска инфекционных послеоперационных осложнений. Поэтому в отделениях трансплантации особенно тщательно нужно соблюдать меры асептики.

Для иммуносупрессии в основном используют следующие препараты.

Циклоспорин - циклический полипептидный антибиотик грибкового происхождения. Подавляет транскрипцию гена интерлейкина-2, необходимого для пролиферации Т-лимфоцитов, и блокирует Т-интерферон. В целом иммунодепрессивное действие избирательное. Применение циклоспорина обеспечивает хорошую приживляемость трансплантата при относительно низкой вероятности инфекционных осложнений.

Отрицательный эффект применения препарата - нефротоксичность, но его положительные свойства позволяют применять циклоспорин в качестве основного иммунодепрессанта и при трансплантации почки.

Сиролимус - макролидный антибиотик, структурно родствен так- ролимусу. Подавляет регуляторную киназу («мишень сиролимуса») и уменьшает клеточную пролиферацию в цикле деления клеток. Действует на гемопоэтические и негемопоэтические клетки. Применяют в базовой иммуносупрессии в качестве основного или дополнительного компонента. Нет необходимости постоянного контроля концентрации препарата в крови. Возможные осложнения применения пре- парата: гиперлипидемия, тромботическая микроангиопатия, анемия, лейкопения, тромбоцитопения.

Азатиоприн. В печени превращается в меркаптопурин, подавляющий синтез нуклеиновых кислот и деление клеток. Применяют в сочетании с другими препаратами для лечения кризов отторжения. Возможно развитие лейко- и тромбоцитопении.

Преднизолон. Стероидный гормон, оказывающий мощное неспе- цифическое депрессивное действие на клеточный и гуморальный иммунитет. В чистом виде не используют, входит в состав схем иммунодепрессии. В высоких дозах применяют при кризах отторжения.

Ортоклон. Содержит антитела к CD3+-лимфоцитам. Применяют для лечения кризов отторжения в комплексе с другими препаратами.

Антилимфоцитарный глобулин и антилимфоцитарные сыворотки. Были введены в клиническую практику в 1967 г. для профилактики отторжения у больных с аллотрансплантацией почки. В настоящее время широко используют для профилактики и лечения отторжения, особенно у пациентов со стероид-резистентным отторжением. Оказывают иммунодепрессивное действие за счёт угнетения Т-лимфоцитов.

Кроме перечисленных препаратов, используют и другие средства: ингибиторы кальциневрина, моноклональные и поликлональные антитела, гуманизированные анти-ТАС антитела и пр.

Гистосовместимость — совместимость органов и тканей, например при трансплантации совместимая ткань не отторгается организмом реципиента. Определяется специфическими антигенными комплексами HLA системы расположенных на мембране клеток.

Гистосовместимость играет ключевую роль в успешности трансплантации органов и тканей. В норме организм противится введению в себя чужеродного белка, отвечая на него иммунной агрессией. Для осуществления успешной пересадки органа необходимо максимально точное совпадение донора и реципиента по антигенной структуре рецепторов. В зависимости от органа производится проверка разных антигенов для выявления совместимости.

Простейшим примером определения гистосовместимости является определение групп крови и резус-фактора перед переливанием. Чем больше специфических антигенов имеется в пересаживаемом органе или ткани, тем более трудным является подбор подходящего донора.

Совместимость по системе HLA

Совместимость по антигенам HLA считают определяющей при подборе донора. Комплекс генов, контролирующих синтез основных антигенов гистосовместимости, расположен в VI хромосоме. Полиморфизм антигенов HLA весьма широк. В трансплантологии основное значение имеют локусы А, В и DR.

В настоящее время идентифицировано 24 аллеля локуса HLA-A, 52 аллеля локуса HLA-B и 20 аллелей локуса HLA-DR. Комбинации генов могут быть крайне разнообразными, и совпадение одновременно во всех трёх указанных локусах практически невозможно.

После определения генотипа (типирования) производят соответствующую запись, например «HLA-A₅ (антиген кодируется 5 сублокусом локуса А VI хромосомы), А₁₀, В₁₂, В₃₅, DR_w6» и т.д.

Отторжение в раннем послеоперационном периоде обычно связано с несовместимостью по HLA-DR, а в отдалённые сроки - по HLA-A и HLA-B. При полном совпадении HLA-A и HLA-B вероятность приживления донорской почки, например, в течение 2 лет составляет около 90%, при совпадении наполовину - 65-85%.

.Стадии заживления раны.

Проходит раневой процесс в определенной последовательности и имеет три фазы:

I фаза - фаза воспаления (1-5-й день);
II фаза - фаза регенерации (6-14-й день);
III фаза - фаза рубцевания и эпителизации (от 15 суток до 6 месяцев).

Фаза воспаления имеет два периода: сосудистых изменений и очищения раны от некротических тканей.

Период сосудистых изменений - в результате повреждения сосудов и сложных биохимических процессов в зоне повреждения нарушается микроциркуляция, происходит экссудация плазмы, лимфы, из сосудистого русла выходят форменные элементы (лейкоциты, лимфоциты, макрофаги). Развивается отек, происходит лейкоцитарная инфильтрация тканей, т. е. создаются условия для очищения раны.
Период очищения раны от некротических тканей - некролиз. В тканях, окружающих рану, появляются форменные элементы, которые фагоцитируют некротические массы, выделяют протеолитические ферменты и удаляют токсины, продукты белкового распада и микробов из раны с воспалительным экссудатом. В результате рана очищается от некротических тканей, купируются симптомы воспаления и наступает следующая фаза раневого процесса.

Фаза регенерации начинается с 6-го дня после травмы и характеризуется развитием восстановительных регенеративных процессов. В ране происходит интенсивный рост новых кровеносных и лимфатических сосудов, улучшается кровообращение, уменьшается гипоксия, и постепенно, к 14-му дню, стихает воспалительная реакция. В ране образуются новые сосуды, созревает грануляционная ткань, которая способствует ликвидации дефекта тканей.

Определение группы крови по системе АВ0 (стандартная методика).

1. Исследование проводится при помощи двух серий стандартных гемагглютинирующих сывороток (I сыворотка – этикетка бесцветная, II – синяя, III – красная, IV – ярко-желтая) на подписанной (фамилия больного) фарфоровой пластинке или тарелке.

2. Соотношение объема исследованной крови и сыворотки должно быть 1:10.

3. Исследование можно производить при температуре воздуха от 15 до 250С.

4. Пластинку осторожно покачивают. По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 мин, в капли добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия. Результат читают через 5 мин:

1) I группа крови - агглютинации нет ни в одной капле;

2) II группа - стандартные сыворотки I и III групп агглютинируют эритроциты, а с сывороткой II группы агглютинация не наступает;

3) III группа - стандартные сыворотки I и II групп дают положительную реакцию, а сыворотка III группы - отрицательную;

4) IV группа - стандартные сыворотки всех трех групп вызывают агглютинацию. Однако для окончательного заключения необходимо провести контрольное исследование на специфичность реакции со стандартной гемагглютинирующей сывороткой IV группы.

Определение группы крови по системе АВО (экспресс-методика).

1. Исследование проводят двумя моноклональными сыворотками: анти-А (розового цвета) и анти-В (бирюзового цвета).

2. Реакция проводится на фарфоровой пластинке при обычном температурном режиме.

3. Наблюдают при покачивании в течение 3 мин.

Результат читается следующим образом:

1) с сывороткой анти-А агглютинации нет, а с анти-В есть - исследуемая кровь В (III);

2) в капле с сывороткой анти-А наступила агглютинация, с анти-В нет - исследуемая кровь А (II);

3) агглютинация наступила с обеими сыворотками - исследуемая кровь АВ (IV);

4) агглютинация не наступила в обеих каплях - кровь 0 (I);

24.

Гемотрансфузионные осложнения характеризуются более тяжелыми клиническими симптомами и могут привести к смерти больного. Самой частой причиной осложнений является переливание, несовместимой крови (иногруппной или резуснесовместимой). Реже осложнения наблюдаются от переливания недоброкачественной крови (перегретой, загрязненной бактериями, неправильно хранившейся и т. п.), от погрешностей в технике (введение воздуха, сгустков крови в кровяное русло и т. д.), при пренебрежении противопоказаниями к переливанию крови.

Осложнения выражаются в виде острой сердечной недостаточности, отека легких, мозга. Время развития трансфузионных осложнений различно и зависит во многом от их причин. Так, при воздушной эмболии катастрофа может наступить немедленно после проникновения воздуха в кровяное русло. Наоборот, осложнения, связанные с сердечной недостаточностью, развиваются в конце или вскоре после переливания больших доз крови, плазмы. Осложнения при переливании несовместимой крови развиваются быстро, часто уже после введения небольших количеств такой крови, реже катастрофа наступает в ближайшее время по окончании переливания. Течение посттрансфузионных осложнений может быть подразделено на 4 периода: 1) гемотрансфузионный шок; 2) олиго-анурия; 3) восстановление диуреза; 4) выздоровление (В. А. Аграненко). Картина гемотрансфузионного шока (I период) характеризуется падением артериального давления, тахикардией, резким нарушением дыхания, анурией, повышенной кровоточивостью, что может привести к развитию кровотечения, особенно если несовместимое переливание крови производилось во время операции или в ближайшие часы после нее. При отсутствии рациональной терапии гемотрансфузионный шок может привести к смерти. Во II периоде состояние больного остается тяжелым из-за прогрессирующего нарушения функции почек, электролитного и водного обмена, нарастания азотемии и усиления интоксикации, что часто приводит к смерти. Длительность этого периода обычно от 2 до 3 недель и зависит от тяжести поражения почек. Менее опасен III период, когда восстанавливается функция почек, нормализуется диурез. В IV периоде (выздоровления) длительно держится анемизация. В I периоде трансфузионных осложнений необходимо бороться с тяжелыми гемодинамическими нарушениями и предупреждать отрицательное воздействие токсических факторов на функции жизненно важных органов, в первую очередь почки, печень, сердце. Здесь оправданы массивные обменные П. к. в дозе до 2—3 л с использованием одногруппной резус-совместимой крови малых сроков хранения, полиглюкина, сердечно-сосудистых средств. Во II периоде (олигурии, анурии, азотемии) терапия должна быть направлена на нормализацию водного, электролитного обмена и борьбу с интоксикацией и нарушением функции почек. Больному устанавливают строгий водный режим. Прием жидкостей ограничивают до 600 мл в сутки с добавлением такого количества жидкости, которое больной выделил в виде рвотных масс и мочи. В качестве трансфузионной жидкости показаны гипертонические растворы глюкозы (10—20% и даже 40%). Не менее 2 раз в сутки назначают промывания желудка и сифонные клизмы. При нарастании азотемии и усилении интоксикации показаны обменные переливания крови, внутрибрюшной и внутрикишечный диализ и особенно гемодиализ с применением аппарата «искусственная почка». В III и особенно в IV периодах проводят симптоматическую терапию.

У некоторых больных вскоре после переливания крови могут развиваться посттрансфузионные реакции, которые, в отличие от осложнений, не сопровождаются длительными нарушениями функций органов и систем и не представляют опасности для жизни. Наиболее типичными клиническими симптомами таких реакций являются общее недомогание, озноб, повышение температуры, боли в пояснице, тошнота, рвота, головная боль, аллергическая сыпь типа крапивницы, зуд кожи, отек век и т. д. Как правило, реакция начинается спустя 20 — 30 мин после гемотрансфузии, иногда во время нее и продолжается от нескольких минут до нескольких часов. В зависимости от тяжести клинического течения различают три степени посттрансфузионных реакций: легкую, среднюю и тяжелую. Легкая реакция характеризуется повышением температуры тела до 1° от исходной, общим недомоганием, познабливанием, головной болью и болями в мышцах конечностей. Перечисленные явления кратковременны, и специальных лечебных мероприятий для их устранения не требуется. Посттрансфузионные реакции средней тяжести сопровождаются повышением температуры тела до 1,5 — 2° от исходной, нарастающим ознобом, учащением пульса и дыхания. В ряде случаев может появляться крапивница. Нередко обостряются боли, обусловленные основным заболеванием. Тяжелые посттрансфузионные реакции характеризуются повышением температуры более чем на 2° от исходной, причем наблюдается потрясающий озноб, цианоз губ, сильная головная боль, рвота, боль в поясницей костях, одышка, крапивница, отеки типа Квике, лейкоцитоз. Больные, у которых развились посттрансфузионные реакции или имеется основание предполагать их появление, требуют обязательного врачебного наблюдения и при необходимости своевременного лечения. В зависимости от причины появления и клинического течения различают реакции пирогенные, аллергические и анафилактические. Пирогенные реакции обусловлены внесением пирогенов в кровь реципиента во время гемотрансфузии. Образование пирогенов может происходить в консервированной крови или в недостаточно тщательно подготовленных системах для переливания. Пирогенные посттрансфузионные реакции проявляются в основном общим недомоганием, лихорадкой и ознобом. В зависимости от тяжести они также могут быть легкие, средние и тяжелые.

Пробы на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента

4.1. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином

4.2. Проба на совместимость на плоскости при комнатной температуре

4.3. Непрямая проба Кумбса

4.4. Проба на совместимость с применением 10% желатина

4.5. Проба на совместимость с применением 33% полиглюкина

Проба на индивидуальную совместимость позволяет убедиться в том, что у реципиента нет антител, направленных против эритроцитов донора и таким образом предотвратить трансфузию эритроцитов, несовместимых с кровью больного.

Проба на совместимость, выполняемая на плоскости при комнатной температуре, имеет целью выявить у реципиента полные групповые агглютинины системы АВ0, MNSs, Lewis и др. Проба на совместимость с применением 10% желатина, 33% полиглюкина, непрямая проба Кумбса предназначена для выявления у реципиента неполных групповых антител. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином предусматривает выявление и тех и других антител, в том числе групповых гемолизинов.

Наиболее чувствительной и рекомендуемой является двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином, затем комбинация двух проб - пробы на плоскости при комнатной температуре и непрямой пробы Кумбса. Вместо непрямой пробы Кумбса может быть применена реакция конглютинации с 10% желатином или реакция конглютинации с 33% полиглюкином. Последняя проба уступает по чувствительности первым двум, однако занимает меньше времени.

StudFiles.ru

Определение групповой принадлежности крови (система АВ0)

Материальное оснащение: гемагглютинирующие сыворотки групп 0ab (I), Аb (II), Вa (III) двух различных серий, сыворотка группы АВ0 (IV), изотонический раствор NaCl, пипетки, предметные стекла или стеклянные палочки, планшет для определения групп крови, донорская кровь, игла-скарификатор одноразового пользования, спирт, вата.

Техника определения групп крови при помощи стандартных гемагглютинирующих сывороток

В верхней части планшета надписывают фамилию и инициалы лица (испытуемого или донора), у которого определяют групповую принадлежность крови. На смачиваемую белую поверхность планшета, в ячейки, надписанные обозначениями: слева - 0ab (I), в середине - Аb (II), справа - Вa (III), пипеткой наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки I, II, III групп, содержащей соответственно агглютинины I - a и b; II - b и III - a. Так как используют стандартные сыворотки двух различных серий каждой группы, то всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0ab (I), Аb (II) и Вa (III). Сухой стеклянной палочкой или краем предметного стекла по одной маленькой капле (0,01 мл), приблизительно в 10-20 раз меньше капли сыворотки, исследуемую кровь, взятую из пальца (или донорскую кровь) переносят в ячейки рядом с каплей стандартной сыворотки. Соотношение должно быть 1 : 10, т.е. 1 часть крови, 10 частей сыворотки.

Другой стеклянной палочкой (или другим краем предметного стекла) перемешивают каплю крови с сывороткой группы 0ab (I) до тех пор, пока смесь не окрасится в равномерно розовый цвет. Следующей стеклянной палочкой (другим углом стекла) перемешивают следующую каплю крови с сывороткой группы Аb (II) и также поступают с сывороткой группы и Вa (III). Так же смешивают кровь с сыворотками во втором ряду.

После размешивания капель планшет покачивают, затем на 1 минуту оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции производят при легком покачивании планшета в течение 5 минут. Агглютинация наступает обычно в течение первых 19-30 секунд, однако наблюдение производят не менее 5 минут ввиду возможности позднего наступления агглютинации в случае слабой агглютинабельности эритроцитов (А₂ или А₂В).

Результат реакции в каждой капле может быть положительным (+) или отрицательным (-).

Положительный результат (+) выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов; агглютинаты видны невооруженным глазом сначала в виде мелких красных зернышек, постепенно сливающихся в более крупные хлопья. При этом сыворотка постепенно обесцвечивается. По мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минут, в эти капли добавляют по одной большой капле (0,1 мл) физиологического раствора NaCl для разрушения иногда наступающей ложной агглютинации - неспецифического склеивания эритроцитов в так называемые монетные столбики. Планшет покачивают и продолжают исследование до истечения 5 минут.

В тех случаях, когда положительный результат получается со стандартными сыворотками всех трех групп (во всех каплях), для исключения неспецифической агглютинации проводится дополнительное исследование испытуемых эритроцитов со стандартной сывороткой группы АВ₀ (IV), не содержащей групповых агглютининов. Для этого на поверхность 7-й ячейки наносят одну большую каплю (0,1 мл) сыворотки группы АВ₀ (IV) и рядом - маленькую каплю (0,01 мл) крови. Кровь смешивают с сывороткой и при покачивании планшета исследуют реакцию в течение 5 минут. Лишь отсутствие агглютинации с сывороткой группы АВ₀ (IV) позволяет учесть положительный результат реакции с сыворотками 0ab (I), Аb (II) и Вa (III) как истинный.

Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия реакции изогемагглютинации. Оценку результата см. на рисунке 1.

Результаты реакций в каплях с сыворотками могут дать четыре различных комбинации положительных и отрицательных реакций.

1. Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, т.е. все смеси остались равномерно окрашенными в розовый цвет без признаков агглютинации, то испытуемая кровь не содержит агглютиногенов и, следовательно, принадлежит к группе 0ab (I).

2. Если сыворотки групп 0ab (I) и Вa (III) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Аb (II) - отрицательную, то испытуемая кровь содержит агглютиноген А и эта кровь принадлежит к группе Аb (II).

3. Если сыворотки групп 0ab (I) и Аb (II) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вa (III) - отрицательную, то испытуемая кровь содержит агглютиноген В, т.е. принадлежит к группе Вa (III).

4. Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В - и принадлежит к группе АВ₀ (IV) при условии, что в течение 5 минут кровь этой группы с сывороткой группы АВ₀ (IV) в 7-й ячейке не дала агглютинации.

Выражение практического результата:

Группу крови записывают по общепринятым в странах СНГ правилам с обязательным указаниям буквенного обозначения выявленных агглютиногенов (агглютиногена), затем - агглютининов и в скобках римской цифрой - группа. Например, группа крови Иванова И.П. - 0ab (I), или Аb (II), или Вa (III), или АВ₀ (IV).

Результат реакции со стандартными сыворотками групп	Исследуемая кровь принадлежит к группе
Oab	Ab	Ba
(-)	(-)		O(I)
(-)	(-)	(-)

(+)	(-)	(+)	A(II)
(+)		(+)

(+)	(+)	(-)	B(III)
(+)	(+)	(-)

(+)	(+)	(+)	AB(IV)
(+)	(+)	(+)
Контроль с сывороткой группы AB(IV) (-)

Рис 1.Оценка результатов исследования группы крови по системе ABO

studopedia.ru

Определение группы крови цоликлонами: алгоритм

Все в организме человека обусловлено выработкой различных веществ. Не исключением является и группа крови, тип которой зависит от антигенного состава эритроцитов.

Современная медицина быстро развивается, и определение группы крови уже давно не в новинку. Существует множество методов ее определения. Одним из наиболее широко распространенных является определение группы крови цоликлонами.

Что это такое?

Цоликлоном называют специальное антитело, реагирующее с антигенами, расположенными на поверхности мембран эритроцитов. Для их получения используют методы генной инженерии – вначале получают специальные бактерии, которые вводят в организм мышей. После иммунизации организма мыши получают ее асцитную жидкость, из которой впоследствии и выделяют необходимые антитела.

Они представляют собой иммуноглобулины класса М.

Благодаря особой технологии изготовления, цоликлоны безопасны для человека в эпидемиологическом плане.

Вещество выпускается в виде водно-солевого раствора, который добавляют к имеющимся образцам крови. Для каждой группы антигенов имеется собственный раствор цоликлона – анти-А цоликлон имеет розовую окраску, анти-В – голубую, а цоликлон анти-D бесцветен.

Свое название препараты получили от названия места, где они были созданы – Центральный ордена Ленина институт переливания крови в Москве.

Методика определения

Определение группы крови цоликлонами может проводиться в нативной крови с добавлением консерванта или без него, а также при исследовании капиллярной крови, взятой из пальца. Непосредственно определение группы проводится на специальной пластине или планшете.

В первую очередь, на планшет наносится капля раствора цоликлона под соответствующей пометкой. Рядом с раствором цоликлона наносится капля исследуемой крови, и они смешиваются между собой. Определение группы крови цоликлонами проводится при равномерном покачивании пластины из стороны в сторону. Визуально, наблюдается агглютинация эритроцитов (слипание их между собой). Если результат отрицательный, агглютинации не происходит.

Процедура обязательно проводится при соблюдении определенного температурного режима – от 15 до 25 градусов тепла при нормальной освещенности. Перед проведением процедуры следует убедиться, что срок годности цоликлонов не истек.

В некоторых учреждениях с целью контроля за препаратами обязательно следует зафиксировать время открытия средства и срок его годности. Рекомендуется документально отразить срок годности реагента, если проводится определение группы крови цоликлонами. Фото используемых флаконов делают редко, однако подобная фиксация также возможна.

Интерпретация результатов

После проведения теста уже можно узнать, какая же группа крови у пациента.

Каковы же результаты исследования, если проводилось определение группы крови цоликлонами? Таблица сопоставления цоликлона и группы крови позволяет разобраться в полученных результатах.

цоликлон	1. I(Rh+)	2. I(Rh-)	3. II(Rh+)	4. II(Rh-)	5. III(Rh+)	6. III(Rh-)	7. IV(Rh+)	8. IV(Rh-)
Анти-А			+	+			+	+
Анти-В					+	+	+	+
Анти-D	+		+		+		+

Как видно из таблицы, если агглютинация произошла в ячейке пластины под номером 3 или 4, значит, кровь второй группы (агглютинация осуществилась за счет взаимодействия антигена А, расположенного на мембране эритроцита, и специального антитела, присутствующего в растворе анти-А-цоликлона). Соответственно, если агглютинация наблюдается в ячейке номер 5 или 6, то и группа крови – третья. Если агглютинации не произошло ни в одном указанном секторе, значит, исследуемая кровь не имеет антигенов, на что напрашивается вывод, что группа крови – первая.

Возможно, что агглютинация происходит во всех лунках. Обычно, это говорит о некачественном препарате либо нарушении правил проведения исследования.

Для чего проводится определение группы крови цоликлонами?

В настоящее время цоликлоны используются преимущественно для определения группы крови и резус-фактора. Исследование может проводиться как планово, по назначению участкового врача-терапевта, так и по экстренным показаниям, когда требуется переливание крови (в ходе операции произошла массивная кровопотеря или пациент был доставлен с обширной травмой и массивным кровотечением).

В поликлинике определение группы проводится преимущественно за счет использования сывороток. Группа крови по цоликлонам определяется чаще всего в стационаре или специализированных лабораториях.

К использованию цоликлонов прибегают, обычно, при невозможности использования сывороток.

Скорость получения результатов несколько быстрее, чем при исследовании стандартными сыворотками, что делает методику более универсальной. Многие лаборатории стремятся перейти на использование данного метода.

Препараты цоликлонов

Какие же есть разновидности цоликлональных препаратов?

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D (есть три разновидности – супер, вызывающая прямую агглютинацию, просто анти-D-цоликлон, при добавлении которого развивается непрямая агглютинация, и анти-D-микс препарат, имеющий в своем составе компоненты первых двух). Они позволяют не только определить группу крови цоликлонами, но и выявить резус-принадлежность.

Другие растворы отличаются сугубо по названию, так как входящие в них антитела – иммуноглобулины классов М и G позволяют только типировать кровь по стандартным, АВ0, антигенам. Различие между ними заключается только в механизме слипания эритроцитов (прямая или непрямая агглютинация).

Каждый из данных препаратов имеет срок годности и особенности использования. Однако наибольшее распространение в клинической лабораторной диагностике получили только три препарата, указанные выше (анти-А, анти –В, анти-D).

Неправильная трактовка результатов

Иногда возможно получение ложных, недостоверных результатов. Например, агглютинация произошла во всех ячейках планшетки или при добавлении крови к препарату, например, изменился их цвет.

Чтобы предотвратить подобные результаты, если проводится определение группы крови цоликлонами, алгоритм процедуры предусматривает некоторые правила. В первую очередь следует обратить внимание на срок годности цоликлонов. Реагенты с истекшим сроком обращения использовать недопустимо.

Обязательно следует соблюдать и условия проведения процедуры. В помещении должно быть оборудовано рабочее место с достаточным освещением и температурным режимом. Если в инструкции к препарату описана и необходимая влажность в помещении, необходимо учитывать и ее.

Немаловажным является и чистота рабочей планшетки, загрязнение которой часто приводит к ошибкам в исследовании и получению неправильных результатов.

Где можно провести исследование?

Определение группы крови цоликлонами получает все большее распространение. Если раньше данная процедура проводилась только в специализированных стационарах (например, сугубо в отделениях хирургии и гематологии), то сейчас данная процедура доступна практически в любой оборудованной лаборатории.

Данная методика начинает распространяться и в поликлинической сети для экспресс-определения группы крови и скорейшего выставления диагноза пациенту.

Многие центры частной медицины и косметологии предлагают проведение данной услуги на платной основе. Бесплатно процедура, как уже было сказано, проводится при наличии направления терапевта.

Если нет возможности обратиться в поликлинику, то как определить группу крови по цоликлонам? При наличии дома специальной планшетки и набора препаратов, исследование можно проводить и самостоятельно, помня, однако, о необходимости соблюдения условий процедуры и особенно – стерильности.

syl.ru