Определение группы крови стандартными сыворотками

Техника определения группы крови системы АВ0 стандартными сыворотками

Показания:необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить:стандартную тарелочку с углублениями;набор стеклянных палочек;изотонический раствор хлорида натрия;набор гемагглютинирующих сывороток 1,2,3,4 групп двух серий;пипетки;исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки;перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

  1. Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
  2. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
  3. Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

на белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

с помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

по мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом – обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

  1. Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
  2. Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 – 25 0С.

№ 11

studopedia.ru

Определение групп крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток

Оснащение: набор стандартных изогемагглютинирующих сывороток I-IV групп крови двух различных серий, белые фарфоровый или эмалированный планшет со смачиваемой поверхностью, на котором расположено 8 (или 7) лунок, маркированных 0(I), А (II), B(III), AB(IV), 0,9% раствор хлорида натрия, пипетки, стеклянные палочки.

Техника выполнения. Процедура проводится в хорошо освещённом помещении при температуре воздуха от 15 до 25 ºС. На планшет под соответствующую маркировку наносят сыворотки I, II, III групп крови в объеме ~ 0,1 мл. Кровь у больного берут из пальца или из вены и добавляют по ~ 0,01 мл (малая капля) к сыворотке. Кровь и сыворотка смешиваются стеклянными палочками. Ожидание реакции гемагглютинации 0,5-5 минут. В те капли, где произошла агглютинация добавляют по 1 капле изотонического раствора, после чего производят учёт результатов пробы согласно приведённой ниже схеме.

0(I) А (II) B(III) AB (IV) Группа крови
- - Не проводят 0(I)
+ - + Не проводят А (II)
+ - Не проводят B(III)
+ + - AB (IV)

Рис. 61. Схема учёта результатов пробы при определении группы крови с помощью набора стандартных сывороток. На схеме обозначено: + агглютинация, - агглютинация отсутствует.

Обращаем внимание, что проба с сывороткой IV группы (не содержащей никаких агглютиногенов) проводится только при наличии агглютинации во всех трёх лунках на планшете для подтверждения определения IV группы путём исключения неспецифической агглютинации.

Рис. 62. Внешний вид эмалированного планшета, соответствующего группе крови В(III).

studopedia.ru

Понятие о группах крови

Группы крови системы АВ0

Группы крови системы АВ0 были открыты в 1900 году К.Ландштейнером, который смешивая эритроциты одних лиц с сывороткой крови других лиц, обнаружил, что при одних сочетаниях кровь свертывается, образуя хлопья (реакция агглютинации), а при других нет. На основании этих исследований Ландштейнер разделил кровь всех людей на три группы: А, В и С. В 1907 году была обнаружена еще одна группа крови.

Было установлено, что реакция агглютинации происходит при склеивании антигенов одной группы крови (их назвали агглютиногенами), которые находятся в красных кровяных тельцах - эритроцитах с антителами другой группы (их назвали агглютининам), находящимися в плазме - жидкой части крови. Разделение крови по системе АВ0 на четыре группы основано на том, что кровь может содержать или не содержать антигены (агглютиногены) А и В, а также антитела (агглютинины) α (альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).

Первая группа крови - 0 (I)

I группа - не содержит агглютиногенов (антигенов), но содержит агглютинины (антитела) α и β. Она обозначается 0 (I). Так как эта группа не содержит инородных частиц (антигенов), то ее можно переливать всем людям. Человек с такой группой крови является универсальным донором.

Вторая группа крови А β (II)

II группа содержит агглютиноген (антиген) А и агглютинин β (антитела к агглютиногену В). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген В - это I и II группы.

Третья группа крови Вα (III)

III группа содержит агглютиноген (антиген) В и агглютинин α (антитела к агглютиногену А). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген А - это I и III группы.

Четвертая группа крови АВ0 (IV)

IV группа крови содержит агглютиногены (антигены) А и В, но содержит агглютининов (антител). Поэтому ее можно переливать только тем, у кого такая же, четвертая группа крови. Но, так как в крови таких людей нет антител, способных склеиться с вводимыми извне антителами, то им можно переливать кровь любой группы. Люди с четвертой группой крови являются универсальными реципиентами.

Группы крови по системе АВО

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время существует три способа опреде­ления групп крови по системе АВО:

- по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам;

- с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Суть метода сводится к обнаружению в испыту­емой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей использу­ется реакция агглютинации. Пробу нужно делать в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25° С.

Для проведения пробы необходимы: - Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных се­рий. Сыворотки для определения групп крови изготав­ливают из донорской крови в специальных лаборато­риях. Хранятся сыворотки в холодильнике при темпе­ратуре 4 - 8° С. Срок годности сыворотки указывают на этикетке. На этикетке также указывается титр (то мак­симальное разведение сыворотки, при котором может наступить реакция агглютинации), который должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1:16 /32). Сыворотка должна быть прозрачной, без при­знаков гниения. Стандартные сыворотки для удобства подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Эти цвета сопутствуют всем этикеткам на пре­паратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

- Белые фарфоровые или эмалированные тарел­ки или другие пластинки со смачиваемой поверх­ностью, маркированные, согласно группам крови.

— Изотонический раствор хлорида натрия.

— Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предмет­ные стекла).

Техника проведения реакции.

1. Под соответствующими обозначениями груп­пы крови на тарелку (пластинку) наносят сыворот­ку I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля диаметром около 1 см). Чтобы избежать оши­бок, наносят две серии сывороток, поскольку одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Таким образом, получается 6 капель, образующих два ряда по три капли в сле­дующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).

2. Кровь для исследований берут из пальца или из вены. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель иссле­дуемой крови величиной примерно с булавочную го­ловку 0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Причем количество сыворотки должно в 10 раз превышать количество исследуемой крови. Затем их осторожно переме­шивают между собой стеклянными палочками с за­кругленными краями.

Возможна и более простая методика: на тарел­ку наносится одна большая капля крови, потом ее забирают оттуда уголком предметного стекла и переносят каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая ее с последней. При этом кровь каж­дый раз берут чистым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не смешивались.

3. Смешав капли, тарелку периодически покачи­вают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не ме­нее 5 минут, так как возможна более поздняя агглю­тинация, например с эритроцитами группы А2 (II).

4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.

Реакция агглютинации может быть положитель­ной или отрицательной

При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невоору­женным глазом мелкие красные зернышки (агглю-тинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мел­кие зернышки постепенно сливаются в более круп­ные зерна или даже в хлопья неправильной формы. При отрицательной реакции капля остается равно­мерно окрашенной в красный цвет.

Результаты реакций двух серий в каплях с сыво­роткой одной и той же группы должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответству­ющей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сы­воротками.

Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).

Определение групп крови моноклональными антителами

Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые по­лучают с помощью гибридомной, биотехнологии.

Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует спе­цифические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, ха­рактерна для опухолевой клетки и присущей лим­фоциту способностью синтезировать антитела.

Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, при­меняемые для определения агглютиногенов эритроци­тов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.

Техника проведения.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соот­ветствующими надписями: анти-А или анти-В. Ря­дом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После переме­шивания компонентов наблюдают за реакцией агг­лютинации в течение 2-3 минут. Оценка результа­тов очень проста.

Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выде­лить три основные группы ошибок: ошибки, свя­занные с низким качеством реагентов; техничес­кие ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови спомощью моноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыво­ротке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной темпера­туре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эрит­роциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подоб­ное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.

Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности про­водить при температуре 37° С, они исчезают.

Нужно строго помнить, что во всех случаях не­четкого или сомнительногскрезультата следует про­вести повторное определение групп крови при по­мощи стандартных сывороток других серий, а так­же перекрестным способом.

StudFiles.ru

Стандарт действий медицинской сестры при определении группы крови по системе АВО

- На пластине для определения группы крови слева направо подписывают группы сывороток 0 αß (I), Аß (II), Вα (III) и в углу ФИО пациента.

- В два ряда по три большие капли соответственно подписям на пластинку слева направо наносятся стандартные сыворотки 0 αß (I), Аß (II), Вα (III) (0,1 мл) . Каждая сыворотка наносится отдельной пипеткой (чаще используют глазные пипетки).

- Рядом с каждой каплей сыворотки палочкой (или отдельной пипеткой) наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле (0,01 мл).

- Cоотношение"сыворотка : кровь"должна быть10:1.

( Ориентировочно капля стандартной сыворотки должна быть ровна копеечной монете, капелька крови = головке портняжной булавки)

- Капли тщательно перемешивают палочками (каждую каплю - отдельной палочкой, углом предметного стекла). Наблюдение за ходом реакции проводят при лёгком покачивании пластинки.

- По истечении 3-х минут (но не раньше) в те капли, где наступила агглютинация эритроцитов, для исключения ложной агглютинации добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продолжают наблюдение при покачивании пластин. После внесения физиологического раствора ложная агглютинация исчезает, истинная - остаётся без изменения или усиливается.

- Общее время наблюдения реакции - 5 минут.

Данные оценки результатов реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками:

Группы крови Наличие (отсутствие) агглютинации
О(I) А(II) В(III) АВ(IV)
О αβ (I) - -
А β(II) + - +
В α(III) + -
АВ (IV) + + -

Агглютинация считается истинной, когда в капле появляются красные комочки, а сыворотка осветляется и, если после прибавления к сыворотке, смешанной с кровью, капли физраствора, склеивание эритроцитов не исчезает.

Отрицательным результат считается в том случае, если капля остаётся гомогенно окрашенной и не содержит зёрнышек и комочков.

При определении группы крови с 3 парами стандартных сывороток возможны 4 варианта результатов:

1) признаков агглютинации не даёт ни одна из трёх пар стандартных сывороток - исследуемая кровь принадлежит к 0(I) группе;

2) агглютинации нет с сывороткой A(II) группы. В сыворотках 0(I) и B(III) групп обнаружена агглютинация - исследуемая кровь A(II) группы;

3) агглютинации нет с сывороткой B(III) группы. В сыворотках 0(I) и A(II) групп - агглютинация. Кровь – B(III) группы;

4) все сыворотки вызвали агглютинацию эритроцитов.

В последнем случае для исключения неспецифической агглютинабельности эритроцитов необходимо провести дополнительное исследование со стандартной сывороткой AB(IV) группы. Лишь при отсутствии агглютинации при исследовании с сывороткой IV группы позволяет отнести исследуемую кровь к группе AB(IV).

2.Определение групп крови с моноклональными антителами (цоликлонами анти-А и анти-В, анти-АВ).

. Определение групп крови с моноклональными антителами (цоликлонами анти-А и анти-В, анти- АВ) производиться обычными методами выявления антигенов эритроцитов: при массовом определении в учреждениях служб крови-на планшетах или автоматических системах, при индивидуальном –на белой фарфоровой или другой пластине со смачиваемой поверхностью.

Стандартные реагенты - цоликлоны анти-А и анти-В, анти -АВ получены методом лиофильной сушки. Они не являются продуктами клеток человека и поэтому исключена контаминация препаратов вирусами гепатита и СПИДа (синдрома приобретённого иммунодифицита).

Цоликлоны анти-А (розового цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются во флаконах или ампулах по 20, 50, 100 и 200 доз.

Для каждого определения группы крови достаточно применять по одной серии цоликлонов анти-А и анти-В ( в виду высокой активности реагентов).

Определение групп крови выполняет врач. Медсестра готовит оснащение для выполнения тестов:

- планшеты стандартные

- штатив для пробирок с кровью доноров (реципиентов)

- штатив для цоликлонов

- пипетки

- перчатки

- песочные часы на 5 минут

- журнал для регистрации результатов

- емкости для дезинфекции использованных предметов.

-На планшет или фарфоровую пластинку цоликлоны анти-А и анти-В наносят по одной большой капле (0,1мл) под соответствующие надписи :анти-А, анти-В.

- Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше капли антител (0,01мл).

-При определении группы крови на планшете антитела и кровь смешивают тщательно вымытым сухим шариком, покачивая планшет.

При определении на фарфоровой пластинке кровь и антитела смешивают стеклянной палочкой, которую предварительно промывают и досуха вытирают.

Наблюдение за ходом реакции с цоликлонами проводят при лёгком покачивании пластинки или планшета в течение не более 5 мин.

- Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным.

Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов.

При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет – агглютиногены в ней не обнаружены.

Агглютинация цоликлонами анти-А и анти-В обычно наступает в первые 3-5 сек.

Наблюдение следует вести 2-5 мин в виду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А и В.

studopedia.ru

Читайте также