Определение группы крови с помощью цоликлонов

/ 29

29 Методы определения групп крови и резус-фактора. Профилактика возможных ошибок

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток. В лунки планшета для определения групп крови последовательно наносят пипетками по одной крупной капле стандартной сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных серий каждой группы. Затем наносят в каждую лупку по капле исследуемой крови, в 5 — 10 раз меньшую сыворотки. Сухими стеклянными палочками или путем покачивания планшета смешивают стандартные сыворотки и исследуемую кровь. Через 5 минут оценивают результат (табл. 2).

Таблица 2

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток

Группа исследуемой крови	Стандартные сыворотки
	0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	-	-	-
А(II)	+	-	+
В(III)	+	+	-
AB(IV)	+	+	+

Определение групп крови по стандартным эритроцитам. В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови. Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III). Капли перемешивают покачиванием планшета. Через 5 минут к каждой капле смеси добавляют по 1 капле физиологического раствора и учитывают результат.

Таблица 3

Определение групп крови с помощью стандартных эритроцитов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
	0(I)	А(II)	В (III)
0(I)	-	+	+
А(II)	-	-	+
В(III)	-	+	-
AB(IV)	-	-	-

Определение резус-фактора. На дно сухой пробирки наносят 1 большую каплю универсального реагента анти-резус, затем добавляют такую же каплю исследуемой крови. После встряхивания пробирки производят перемешивание сыворотки анти-резус и крови в течение 5 минут по стенкам пробирки, после чего добавляют 5 — 7 мл физиологического раствора. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

Определение групп крови с помощью цоликлонов. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготовляются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител.

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 5 — 10 мл. Цоликлон анти-А — желтого цвета, анти-В — синего, анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия.

Техника определения групп крови. Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на пластине или планшете, определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 — 25 X.

Наносят на пластину или планшет индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.
Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 — 0,03 мл).
Смешивают кровь с реагентом, покачивая планшет.
Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3 — 5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агтлютинаты видны в виде мелких красных агретатов, быстро смешивающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
Интерпретация результатов реакции агглютинации с цоликлонами представлена в табл. 4.

Таблица 4

Определение групп крови с помощью цоликлонов

Группа исследуемой крови	Стандартные эритроциты
	Анти-А	Анти-В	Анти-АВ
0(I)	_	_	-
А(II)	+	-	+
В(III)	-	+	+
АВ(IV)	+	+	+

Примечание: знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) — се отсутствие

При положительном результате реакции агглютинации со всеми гремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую аглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешивают на плоскости 1 каплю исследуемых эритроцитов с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе AB(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

Определение резус-фактора с помощью цоликлона. В лупку планшета наносят 1 большую каплю цоликлона анти-Д-супер_т рядом наносят 1 маленькую каплю исследуемой крови.

Покачивая планшет, смешивают кровь с цоликлоном. За ходом реакции наблюдают в течение 3 минут. Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

StudFiles.ru

Определение группы крови цоликлонами: алгоритм

Все в организме человека обусловлено выработкой различных веществ. Не исключением является и группа крови, тип которой зависит от антигенного состава эритроцитов.

Современная медицина быстро развивается, и определение группы крови уже давно не в новинку. Существует множество методов ее определения. Одним из наиболее широко распространенных является определение группы крови цоликлонами.

Что это такое?

Цоликлоном называют специальное антитело, реагирующее с антигенами, расположенными на поверхности мембран эритроцитов. Для их получения используют методы генной инженерии – вначале получают специальные бактерии, которые вводят в организм мышей. После иммунизации организма мыши получают ее асцитную жидкость, из которой впоследствии и выделяют необходимые антитела.

Они представляют собой иммуноглобулины класса М.

Благодаря особой технологии изготовления, цоликлоны безопасны для человека в эпидемиологическом плане.

Вещество выпускается в виде водно-солевого раствора, который добавляют к имеющимся образцам крови. Для каждой группы антигенов имеется собственный раствор цоликлона – анти-А цоликлон имеет розовую окраску, анти-В – голубую, а цоликлон анти-D бесцветен.

Свое название препараты получили от названия места, где они были созданы – Центральный ордена Ленина институт переливания крови в Москве.

Методика определения

Определение группы крови цоликлонами может проводиться в нативной крови с добавлением консерванта или без него, а также при исследовании капиллярной крови, взятой из пальца. Непосредственно определение группы проводится на специальной пластине или планшете.

В первую очередь, на планшет наносится капля раствора цоликлона под соответствующей пометкой. Рядом с раствором цоликлона наносится капля исследуемой крови, и они смешиваются между собой. Определение группы крови цоликлонами проводится при равномерном покачивании пластины из стороны в сторону. Визуально, наблюдается агглютинация эритроцитов (слипание их между собой). Если результат отрицательный, агглютинации не происходит.

Процедура обязательно проводится при соблюдении определенного температурного режима – от 15 до 25 градусов тепла при нормальной освещенности. Перед проведением процедуры следует убедиться, что срок годности цоликлонов не истек.

В некоторых учреждениях с целью контроля за препаратами обязательно следует зафиксировать время открытия средства и срок его годности. Рекомендуется документально отразить срок годности реагента, если проводится определение группы крови цоликлонами. Фото используемых флаконов делают редко, однако подобная фиксация также возможна.

Интерпретация результатов

После проведения теста уже можно узнать, какая же группа крови у пациента.

Каковы же результаты исследования, если проводилось определение группы крови цоликлонами? Таблица сопоставления цоликлона и группы крови позволяет разобраться в полученных результатах.

цоликлон	1. I(Rh+)	2. I(Rh-)	3. II(Rh+)	4. II(Rh-)	5. III(Rh+)	6. III(Rh-)	7. IV(Rh+)	8. IV(Rh-)
Анти-А			+	+			+	+
Анти-В					+	+	+	+
Анти-D	+		+		+		+

Как видно из таблицы, если агглютинация произошла в ячейке пластины под номером 3 или 4, значит, кровь второй группы (агглютинация осуществилась за счет взаимодействия антигена А, расположенного на мембране эритроцита, и специального антитела, присутствующего в растворе анти-А-цоликлона). Соответственно, если агглютинация наблюдается в ячейке номер 5 или 6, то и группа крови – третья. Если агглютинации не произошло ни в одном указанном секторе, значит, исследуемая кровь не имеет антигенов, на что напрашивается вывод, что группа крови – первая.

Возможно, что агглютинация происходит во всех лунках. Обычно, это говорит о некачественном препарате либо нарушении правил проведения исследования.

Для чего проводится определение группы крови цоликлонами?

В настоящее время цоликлоны используются преимущественно для определения группы крови и резус-фактора. Исследование может проводиться как планово, по назначению участкового врача-терапевта, так и по экстренным показаниям, когда требуется переливание крови (в ходе операции произошла массивная кровопотеря или пациент был доставлен с обширной травмой и массивным кровотечением).

В поликлинике определение группы проводится преимущественно за счет использования сывороток. Группа крови по цоликлонам определяется чаще всего в стационаре или специализированных лабораториях.

К использованию цоликлонов прибегают, обычно, при невозможности использования сывороток.

Скорость получения результатов несколько быстрее, чем при исследовании стандартными сыворотками, что делает методику более универсальной. Многие лаборатории стремятся перейти на использование данного метода.

Препараты цоликлонов

Какие же есть разновидности цоликлональных препаратов?

Выделяют эритротест-цоликлон анти-D (есть три разновидности – супер, вызывающая прямую агглютинацию, просто анти-D-цоликлон, при добавлении которого развивается непрямая агглютинация, и анти-D-микс препарат, имеющий в своем составе компоненты первых двух). Они позволяют не только определить группу крови цоликлонами, но и выявить резус-принадлежность.

Другие растворы отличаются сугубо по названию, так как входящие в них антитела – иммуноглобулины классов М и G позволяют только типировать кровь по стандартным, АВ0, антигенам. Различие между ними заключается только в механизме слипания эритроцитов (прямая или непрямая агглютинация).

Каждый из данных препаратов имеет срок годности и особенности использования. Однако наибольшее распространение в клинической лабораторной диагностике получили только три препарата, указанные выше (анти-А, анти –В, анти-D).

Неправильная трактовка результатов

Иногда возможно получение ложных, недостоверных результатов. Например, агглютинация произошла во всех ячейках планшетки или при добавлении крови к препарату, например, изменился их цвет.

Чтобы предотвратить подобные результаты, если проводится определение группы крови цоликлонами, алгоритм процедуры предусматривает некоторые правила. В первую очередь следует обратить внимание на срок годности цоликлонов. Реагенты с истекшим сроком обращения использовать недопустимо.

Обязательно следует соблюдать и условия проведения процедуры. В помещении должно быть оборудовано рабочее место с достаточным освещением и температурным режимом. Если в инструкции к препарату описана и необходимая влажность в помещении, необходимо учитывать и ее.

Немаловажным является и чистота рабочей планшетки, загрязнение которой часто приводит к ошибкам в исследовании и получению неправильных результатов.

Где можно провести исследование?

Определение группы крови цоликлонами получает все большее распространение. Если раньше данная процедура проводилась только в специализированных стационарах (например, сугубо в отделениях хирургии и гематологии), то сейчас данная процедура доступна практически в любой оборудованной лаборатории.

Данная методика начинает распространяться и в поликлинической сети для экспресс-определения группы крови и скорейшего выставления диагноза пациенту.

Многие центры частной медицины и косметологии предлагают проведение данной услуги на платной основе. Бесплатно процедура, как уже было сказано, проводится при наличии направления терапевта.

Если нет возможности обратиться в поликлинику, то как определить группу крови по цоликлонам? При наличии дома специальной планшетки и набора препаратов, исследование можно проводить и самостоятельно, помня, однако, о необходимости соблюдения условий процедуры и особенно – стерильности.

syl.ru

Определение группы крови с помощью цоликлонов

Практический аспект

Этико-деонтологический аспект

Цель: подготовить пациента к гемотрансфузии с учетом групповой принадлежности. Показания:переливание крови и ее компонентов. Подготовка техническая: 1.Цоликлоны анти А и анти В. 2.Стеклянные палочки. 3.Фарфоровые планшетки. 4.Физиологический раствор. 5.Песочные часы на 3 минуты. 6. Скарификатор (игла для венепункции и пробирка для крови). 7.Ватные шарики (салфетки). 8.Дезинфицирующий раствор. 9. Стерильные перчатки. Подготовка пациента: 1.Предупредить пациента о предстоящей процедуре. 2.Подготовить пациента к взятию крови (усадить или уложить в зависимости от его состояния). Техника выполнения: 1. Провести гигиеническую обработку рук, надеть стерильные перчатки. 2.Из IV пальца левой кисти пациента (можно из вены) взять кровь. 3.На плоскость планшета или тарелку нанести цоликлоны анти-А и анти-В по две капли (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. 4.Рядом с каплями цоликлонов нанести исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо брать большое количество эритроцитов, т. е. первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови. 5.Наблюдать за реакцией при легком покачивании в течение 2,5 минут. Положительный результат при определении группы крови проявляет себя агглютинацией (склеиванием) эритроцитов. При этом агглютинаты можно увидеть без каких-либо приспособлений в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья. 6.При отрицательной реакции определения группы крови капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. 7.Агглютинация обычно определяется в течении первых 3—5 секунд. Несмотря на это, наблюдение за результатами необходимо вести не меньше 2,5 минут из-за возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Последующие действия: 1. Выполнить дезинфекцию планшетки. 2. Снять перчатки и вымыть руки. 3. Сделать запись о полученном результате в соответствующем журнале. Возможные осложнения:при работе с инфицированной кровью без перчаток возможно заражение персонала. Примечания: 1.Определение групп крови должно проводиться в хорошо освещенном месте при температуре 15-25оС. 2. Авидность, то есть время наступления реакции агглютинации и ее выраженность, у цоликлонов анти-А и анти-В выше, чем у изогемагглютинирующих АВО-сывороток, особенно в случае слабо выраженных антигенов эритроцитов. 3.Цоликлоны не являются клетками человеческих тканей, что исключает возможность инфекционного заражения при попадании их на незащищенные руки персонала.

studopedia.ru

Определение группы крови с помощью цоликлонов

Практический аспект

Этико-деонтологический аспект

Цель: подготовить пациента к гемотрансфузии. Показания:переливание крови и ее компонентов. Подготовить: 1.Цоликлоны анти А и анти В. 2.Стеклянные палочки. 3.Фарфоровые планшетки. 4.Физиологический раствор. 5.Песочные часы на 3 минуты. 6.Пробирки с исследуемой кровью. 7.Ватные шарики (салфетки). 8.Дезинфицирующий раствор. Подготовка пациента: 1.Предупредить пациента о предстоящей процедуре, объяснить её необходимость. 2.Подготовить пациента к взятию крови (усадить или уложить в зависимости от его состояния). Техника выполнения: 1.Из безымянного пальца пациента (можно из вены) взять кровь. 2.На плоскость планшета или тарелку наносят цоликлоны анти-А и анти-В по две капли (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. 3.Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо брать большое количество эритроцитов, т. е. первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови. 4.Наблюдение за реакцией проводят при легком покачивании в течение не более 2,5 минуты. Положительный результат при определении группы крови проявляет себя агглютинацией (склеиванием) эритроцитов. При этом агглютинаты можно увидеть без каких-либо приспособлений в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья. 5.При отрицательной реакции определения группы крови капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются. 6.Агглютинация, обычно, определяется в течении первых 3—5 секунд. Несмотря на это, наблюдение за результатами необходимо вести не меньше 2,5 минут из-за возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Последующие действия: 1.Сделать запись о полученном результате в соответствующем журнале. 2.Выполнить дезинфекцию планшетки. Возможные осложнения:при работе с инфицированной кровью без перчаток возможно заражение персонала. Примечания: 1.Определение групп крови должно проводиться в хорошо освещенном месте при температуре 15-25оС. 2. Авидность, то есть время наступления реакции агглютинации и ее выраженность, у цоликлонов анти-А и анти-В выше, чем у изогемагглютинирующих АВО-сывороток, особенно в случае слабо выраженных антигенов эритроцитов. 3.Цоликлоны не являются клетками человеческих тканей, что исключает возможность инфекционного заражения.

- объяснить пациенту необходимость процедуры. - получить у пациента информированное согласие на процедуру, успокоить пациента. - если пациент не переносит вида крови, попросить его смотреть в сторону. - обеспечение преемственности в работе. - соблюдение инфекционной безопасности, профилактика распространения ВБИ.

studopedia.ru

Работа №9 «Определение группы крови с использованием цоликлонов»

Объект исследования: _________________________________________________________

Методика:

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп крови системы АВО у человека, взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Они являются продуктами гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителобразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Цоликлоны не являются продуктами клеток человека и поэтому исключена контаминация контаминачия препаратов вирусами гепатита и СПИД.

Определение групп крови системы АВО включает выявление антигенов А и В в эритроцитах стандартными антигенами: цоликлон анти-А и цоликлон анти-В.

Анализ производится в помещении с хорошим освещением при температуре от 15 до 250С. На керамическую пластину наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-В (0,1 мл) под соответствующими надписями «анти-А» и «анти-В». В каплю с антителами добавляют по одной маленькой капле исследуемой крови (0,03 мл). Наблюдение за ходом реакции с цоликлонами проводят при легком покачивании пластины в течение 2,5 – 3 минут. Если агглютинация произошла, то результат реакции считается положительным («+»), если нет – отрицательным («-«). Обычно реакция агглютинации с цоликлонами наступает в течение первых 3-4 сек., но наблюдение следует продолжать ввиду возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими более слабые разновидности антигенов А или В.

Оценка результата реакции агглютинации представлена в таблице:

№	Реакция исследуемых эритроцитов с цоликлонами		Исследуемая кровь принадлежит к группе
№	Анти-А	Анти-В	Исследуемая кровь принадлежит к группе
1	-	-	O (I)
2	+	-	A (II)
3	-	+	B (III)
4	+	+	AB (IV)

Результат:

Реакция исследуемых эритроцитов с цоликлонами
Анти-А	Анти-В

Вывод:

Исследуемая кровь принадлежит к группе: ________________________________________

Работа №10 «Определение резус-фактора в крови человека экпресс-методом с универсальной сывороткой»

Объект исследования: _________________________________________________________

Принцип метода:

Для определения резус-фактора используется универсальная сыворотка IV-ой группы крови, содержащая антирезус-агглютинины (анти -D-агглютинины).

На чистую чашку Петри нанести 2 капли сыворотки разных серий. Чистым уголком предметного стекла в каждую каплю сыворотки внести донорскую кровь (1/8 часть от объема сыворотки) и перемешать ее с сывороткой. Чашку Петри оставить на столе и через 8-10 минут рассмотреть капли в проходящем свете на белом фоне. Если агглютинация имеется в обеих стандартных сыворотках, значит кровь резус-положительная. Если агглютинации нет - кровь резус-отрицательная. Резус-отрицательная кровь обязательно должна проверяться дважды во избежание случайной ошибки. Неодинаковая реакция в каплях сыворотки разных серий говорит о непригодности одной из сывороток и требует повторного анализа с использованием других сывороток.

Результаты:

Агглютинация с анти – D сывороткой _________________________________. Следовательно, на поверхности эритроцитов ___________________ антиген D.

Вывод:

У пациента резус - ____________________________ кровь.

StudFiles.ru