Определение группы донора реципиента

Проба на индивидуальную совместимость крови донора и реципиента

Проба на индивидуальную совместимость позволяет убедиться в том, что у реципиента нет антител, направленных против эритроцитов донора и таким образом предотвратить трансфузию эритроцитов, несовместимых с кровью больного.

Проба на совместимость, выполняемая на плоскости при комнатной температуре, имеет целью выявить у реципиента полные групповые агглютинины системы АВ0, MNSs, Lewis и др. Проба на совместимость с применением 10% желатина, 33% полиглюкина, непрямая проба Кумбса предназначена для выявления у реципиента неполных групповых антител. Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином предусматривает выявление и тех и других антител, в том числе групповых гемолизинов.

Наиболее чувствительной и рекомендуемой является двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином, затем комбинация двух проб - пробы на плоскости при комнатной температуре и непрямой пробы Кумбса. Вместо непрямой пробы Кумбса может быть применена реакция конглютинации с 10% желатином или реакция конглютинации с 33% полиглюкином. Последняя проба уступает по чувствительности первым двум, однако занимает меньше времени.

Двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином

Первый этап. В маркированную пробирку вносят 2 объема (200 мкл) сыворотки реципиента и 1 объем (100 мкл) 2% взвеси трижды отмытых эритроцитов донора, суспендированных в физиологической растворе или LISS (раствор низкой ионной силы). Содержимое пробирки перемешивают и центрифугируют при 2500 об/мин (около 600g) в течение 30 с. Затем оценивают наличие гемолиза в надосадочной жидкости, после чего осадок эритроцитов ресуспендируют, слегка постукивая кончиком пальца по дну пробирки, и определяют наличие агглютинации эритроцитов. При отсутствии выраженного гемолиза и/или агглютинации переходят к выполнению второго этапа пробы с использованием антиглобулиновой сыворотки.

Второй этап. Пробирку помещают в термостат при температуре 37°С на 30 мин, после чего снова оценивают наличие гемолиза и/или агглютинации эритроцитов. Затем эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором, добавляют 2 объема (200 мкл) антиглобулиновой сыворотки для пробы Кумбса и перемешивают. Пробирки центрифугируют в течение 30 с, осадок эритроцитов ресуспензируют и оценивают наличие агглютинации.

Учет результатов проводят невооруженным глазом или через лупу. Выраженный гемолиз и/или агглютинация эритроцитов указывает на присутствие в сыворотке реципиента групповых гемолизинов и/или агглютининов, направленных против эритроцитов донора, и свидетельствует о несовместимости крови реципиента и донора. Отсутствие гемолиза и/или агглютинации эритроцитов свидетельствует о совместимости крови реципиента и донора.

Проба на совместимость на плоскости

при комнатной температуре

На пластинку наносят 2 - 3 капли сыворотки реципиента и добавляют небольшое количество эритроцитов с таким расчетом, чтобы соотношение эритроцитов и сыворотки было 1:10 (для удобства рекомендуется сначала выпустить через иглу несколько капель эритроцитов из контейнера на край пластинки, затем оттуда стеклянной палочкой перенести маленькую каплю эритроцитов в сыворотку). Далее эритроциты перемешивают с сывороткой, пластинку слегка покачивают в течение 5 мин, наблюдая за ходом реакции. По истечении указанного времени в реагирующую смесь можно добавить 1 - 2 капли физиологического раствора для снятия возможной неспецифической агрегации эритроцитов.

Учет результатов. Наличие агглютинации эритроцитов означает, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна быть ему перелита. Если по истечении 5 мин агглютинация эритроцитов отсутствует, то это означает, что кровь донора совместима с кровью реципиента по групповым агглютиногенам.

Непрямая проба Кумбса

В пробирку вносят одну каплю (0,02 мл) осадка трижды отмытых эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, и добавляют 4 капли (0,2 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают на 45 мин в термостат при температуре +37°С. По истечении указанного времени эритроциты вновь трижды отмывают и готовят 5% взвесь в физиологическом растворе. Далее 1 каплю (0,05 мл) взвеси эритроцитов на фарфоровую пластинку, добавляют 1 каплю (0,05 мл) антиглобулиновой сыворотки и перемешивают стеклянной палочкой. Пластинку периодически покачивают в течение 5 мин.

Учет результатов проводят невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

Проба на совместимость с применением 10% желатина

В пробирку вносят 1 небольшую каплю (0,02 - 0,03) мл эритроцитов донора, для чего выдавливают из пипетки небольшую каплю эритроцитов и касаются ею дна пробирки, добавляют 2 капли (0,1 мл) желатина и 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента. Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, после чего их помещают в водяную баню на 15 мин или термостат на 30 мин при температуре +46 - 48°С. По истечении указанного времени в пробирки добавляют 5 - 8 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 1 - 2-кратного переворачивания пробирок.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

Проба на совместимость с применением 33% полиглюкина

В пробирку вносят 2 капли (0,1 мл) сыворотки реципиента 1 каплю (0,05) мл эритроцитов донора и добавляют 1 каплю (0,1 мл) 33% полиглюкина. Пробирку наклоняют до горизонтального положения, слегка потряхивая, затем медленно вращают таким образом, чтобы содержимое ее растеклось по стенкам тонким слоем. Такое растекание содержимого пробирки по стенкам делает реакцию более выраженной. Контакт эритроцитов с сывороткой больного при вращении пробирки следует продолжать не менее 3 мин. Через 3 - 5 мин в пробирку добавляют 2 - 3 мл физиологического раствора и перемешивают содержимое путем 2 - 3-х кратного перевертывания пробирки, не взбалтывая.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу. Агглютинация эритроцитов свидетельствует о том, что кровь реципиента и донора несовместимы, отсутствие агглютинации является показателем совместимости крови донора и реципиента.

ДЕВЯТИКАПЕЛЬНАЯ ПРОБА, И ЕЕ ЗНАЧЕНИЕ

Девятикапельная проба предложенная П.М. Максимовым в настоящее время не включена в Приказ МЗ РФ №363 от 25 ноября 2002 г. Тем не менее она имеет определенные достоинства и удобства. На одной плоскости одним лицом одновременно проверяется группа крови донора и реципиента, их индивидуальная совместимость и агглютинирующая способность сыворотки реципиента.

Проба выполняется на одной плоскости, разделенной на девять полей (таблица 6).

Девятикапельная проба. Таблица 6

Донор Реципиент Совместимость О(I) A(II) B(III)

В первых трех (1-3) квадратах определяется группа крови донора двумя сериями стандартных сывороток. Во вторых трех (4-6) квадратах определяется группа крови реципиента двумя сериями стандартных сывороток. В 7-8 квадратах проводится проба на индивидуальную совместимость (сыворотка крови реципиента и эритроциты донора). В 8 квадрат добавляется физиологический раствор с целью исключения неспецифической агглютинации. В 9 квадрате сыворотка реципиента смешивается с заведомо несовместимой кровью. Это позволяет оценить агглютинирующую способность сыворотки реципиента.

Оценивается проба по трем параметрам:

1. группа крови донора и реципиента должны совпадать;

2. в 7 и 8 каплях не должно быть агглютинации;

3. в 9 капле должна быть агглютинация (исключение реципиент AB (IV)).

Проба сохраняется до конца переливания, как свидетельство правильно выполненной и достоверной изосерологической реакции.

studopedia.ru

Лекция Тема: «Переливание крови и ее компонентов»

Трансфузиология– наука о рациональном применении компонентов и препаратов крови с учетом особенностей течения заболевания и свойств используемой среды.

Трансфузия– лечебный метод, заключающийся во введении в кровеносное русло больного компонентов крови, заготовленных от донора или самого реципиента (аутодонорство).

Донор– человек, от которого переливают компоненты крови.

Реципиент– человек, которому переливают компоненты крови.

Иммунологические основы трансфузиологии

Обязательным требованием к гемотрансфузионной терапии является ее безопасность, прежде всего иммунологическая . Трансфузия компонентов крови является, по сути, пересадкой ткани, и возможна только после оценки совместимости крови донора и реципиента.

Классификация групп крови основана на наличии или отсутствии в плазменных и клеточных элементах крови групповых антигенов и антител. В настоящее время известно более 200 групповых антигенов крови, которые объединены в несколько групповых антигенных систем. Групповые антигены передаются по наследству, не меняются в течение жизни, их набор индивидуален у каждого человека.

Различают групповые антигенные системы эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и плазменных белков.

Групповые системы эритроцитов

Известно более 20 антигенных систем эритроцитов, из них для клинической практики наибольшее значение имеют системы АВО и резус. Совместимость по этим двум системам в обязательном порядке учитывается при каждой трансфузии.

Система АВО

Это первая эритроцитарная система антигенов, открыта в 1900г. венским ученым Карлом Ландштейнером. Он обнаружил и изучил три антигена. В 1907г. Ян Янский пришел к заключению о существовании четырех групп крови. С этого времени и по сей день определение групп крови по данной системе основывается на наличии в эритроцитах группоспецифических антигенов (О,А,В), а в сыворотке – антител анти-А(α) и анти-В (β).

Группоспецифические антигены (О,А,В) генетически обусловлены.

Антитела против антигенов системы АВО – изогемагглютинины, относящиеся к классу IgM. Способность к их выработке передается по наследству.

Различают четыре группы крови. Они имеют буквенно-цифровое обозначение:

  • О(I) – эритроциты не содержат антигенов, но в плазме 2 агглютинина (α и β)

- 43% в европейской популяции.

  • А(II) – агглютиноген А и агглютинин β

- 42% в европейской популяции.

  • В(III) – агглютиноген В и агглютинин α

- 11% в европейской популяции.

  • АВ(IV) – агглютиногены А и В, агглютининов нет

- 4% в европейской популяции.

Причина иммунологического конфликта в системе АВО – встреча одноименных агглютининов и агглютининогенов: А-α или В-β.

Групповая система резус

После антигенов АВО система антигенов резус имеет наибольшее значение в клинической практике. Присутствие антигена обозначается знаком «+», а его отсутствие – знаком «-». Резус-принадлежность эритроцитов определяется по наличию в фенотипе антигена Rh. Людей, в эритроцитах которых этот антиген присутствует, относят к резус-положительным, при его отсутствии – к резус-отрицательным. Частота резус-положительных лиц у европейцев – 85%.

Антитела против антигенов резус, в отличие от групповых антител, - иммунные, появляющиеся в результате изосенсибилизации. Их специфичность обусловливается антигенами. При переливании резус-положительных эритроцитов лицам с противорезусными антителами возникают посттрансфузионные реакции гемолитического типа. Это возникает в следующих случаях:

- при повторном переливании резус-положительной крови резус-отрицательному реципиенту. При первом переливании крови в организме человека образуются антирезусные антитела. При повторном переливании резус-положительной крови выработанные ранее антитела вызывают гемагглютинацию эритроцитов.

- во время беременности, если мать имеет резус-отрицательную кровь, а плод – резус-положительную. Агглютиногены резус-системы проникают через плацентарный барьер, где вырабатываются антирезусные антитела. Они проникают в организм плода, где и вызывают реакцию гемагглютинации. У плода развивается тяжелая гемолитическая анемия. Антирезусные антитела сохраняются всю жизнь, каждая следующая беременность более опасна.

StudFiles.ru

Пробы на индивидуальную совместимость

Пробы на индивидуальную совместимость про­водятся в процессе подготовки к гемотрансфузии. Ставят две реакции: пробу на индивидуальную со­вместимость по системе АВО и по резус-фактору. Предварительно для постановки реакций у реци­пиента из вены берут кровь, которую разделяют сгусток и сыворотку (отстаиванием или центрифу­гированием).

а) Проба на индивидуальную совместимость по системе АВО

На белую поверхность (тарелку, пластинку) на­носят крупную каплю {0,1 мл) сыворотки крови реципиента и маленькую капельку (0,01 мл) крови донора из флакона и смешивают их между собой, периодически покачивая тарелку (пластинку). Ре­акция проводится при температуре 15 - 25°С, ре­зультаты оценивают через 5 минут: отсутствие агг­лютинации эритроцитов донора свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента по сис­теме АВО. Появление агглютинации указывает на их несовместимость — такую кровь данному боль­ному переливать нельзя.

б) Проба на индивидуальную совместимость по резус-фактору

После того как установлена совместимость кро­ви донора и реципиента по системе АВО, необходи­мо установить совместимость в отношении резус-фактора. Проба на совместимость по резус-фактору может быть проведена в одном из двух вариантов:

- проба с использованием 33% полиглюкина;

- проба с использованием 10% желатина.

В клинической практике наибольшее распрост­ранение получила проба с полиглюкином. Проба с использованием 33% полиглюкина Реакция проводится в центрифужной пробирке без подогрева в течение 5 минут. На дно пробирки вносят 2 капли сыворотки реципиента, 1 каплю до­норской крови и 1 каплю 33% раствора полиглю­кина. После этого содержимое перемешивают, наклоняя пробирку и вращая ее вокруг оси, рас­пределяя содержимое по стенкам ровным слоем.

Пробирку вращают в течение 5 минут, после чего добавляют 3-4 мл физиологического раствора и аккуратно перемешивают, 2-3 раза наклоняя про­бирку до горизонтальной плоскости (не взбалтывая!). После этого оценивают результат: наличие агглю­тинации эритроцитов свидетельствует о несовмес­тимости крови донора и реципиента по резус-фак­тору, такую кровь переливать нельзя. Равномерное окрашивание содержимого в пробирке, отсутствие реакции агглютинации указывает на совместимость крови донора и реципиента по резус-фактору.

Проба с использованием 10% желатина

На дно пробирки помещают 1 каплю эритроци­тов донора, предварительно отмытых десятикратным объемом физиологического раствора, затем добав­ляют 2 капли подогретого до разжижения 10% ра­створа желатина и 2 капли сыворотки реципиента.

Содержимое пробирки перемешивают и помеща­ют в водяную баню при температуре 46 - 48° С на 10 минут. После этого в пробирку добавляют б - 8 мл физиологического раствора, перемешивают содержи­мое, переворачивая пробирку 1-2 раза, и оценивают результат: наличие агглютинации эритроцитов сви­детельствует о несовместимости крови донора и ре­ципиента, ее переливание недопустимо.

Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным и в ней не наблюдается реакция агг­лютинации, кровь донора совместима с кровью реципиента по резус-фактору.

Биологическая проба

Несмотря на определение совместимости крови донора и больного по системе АВО и резус-фактору, нельзя быть уверенным в полной их совместимости.

Существует большое количество второстепенных групповых систем, которые могут стать причиной

развития осложнений. Для исключения этой возмож­ности в начале гемотрансфузии проводится еще одна проба на совместимость - биологическая проба.

Вначале струйно переливают 10-15 мл крови, после чего трансфузию прекращают (перекрывают капельницу) и в течение 3 минут наблюдают за состоянием больного. При отсутствии клиничес­ких проявлений реакции или осложнения (учаще­ние пульса, дыхания, появление одышки, затруднение дыхание, гиперемия лица и т. д.) вводят вновь 10-15 мл крови и в течение 3 минут снова наблюдают за больным. Так повторяют трижды.

Отсутствие реакций у больного после трехкратной проверки является признаком совместимости вливаемой крови и служит основанием для осуще­ствления всей гемотрансфузии.

При несовместимости крови донора и реципиен­та во время биологической пробы поведение паци­ента становится беспокойным: появляются тахикар­дия, одышка, гиперемия лица, ощущение озноба или жара, стеснение в груди, боли в животе, и очень важ­ный признак - боли в поясничной области.

При появлении этих признаков кровь считают несовместимой и гемотрансфузию не проводят.

studopedia.ru

Определить группу крови АВО и резус-принадлежность реципиента и донора (по эритроцитам в контейнере)

2.1.2. Провести пробу на индивидуальную совместимость крови реципиента и донора (см. ниже) одним из двух способов:

- первый способ: двухэтапная проба в пробирках с антиглобулином;

- второй способ: на плоскости при комнатной температуре и одна из трех проб (непрямая реакция Кумбса, реакция конглютинации с 10% желатином или реакция конглютинации с 33% полиглюкином).

По жизненным показаниям, в случае, если группа крови и резус принадлежность реципиента неизвестны, врач, выполняющий трансфузию, может перелить реципиенту переносчики газов крови (эритроцитная масса, взвесь) группы O(I) резус отрицательная при обязательном проведении проб на индивидуальную совместимость и биологической пробы.

При наличии у реципиента антиэритроцитарных, антилейкоцитарных или антитромбоцитарных антител подбор компонентов крови производят в специализированной лаборатории. Если эритроцитная масса или взвесь подобраны реципиенту индивидуально в специализированной лаборатории, врач, выполняющий трансфузию, перед переливанием определяет группу крови реципиента, донора и проводит только одну пробу на индивидуальную совместимость – на плоскости при комнатной температуре.

Иммуносерологические исследования при переливании корректоров гемостаза и фибринолиза, средств коррекции иммунитета

При переливании корректоров гемостаза и фибринолиза, средств коррекции иммунитета врач, выполняющий трансфузию, обязан:

Определить группу крови АВО и резус-принадлежность реципиента.

Групповую и резус-принадлежность донора врач, выполняющий трансфузию, устанавливает по этикетке на контейнере с трансфузионной средой, пробу на индивидуальную совместимость не проводит.

studopedia.ru

Читайте также