Определение резус принадлежности крови

Определение резус – принадлежности

Возьмите центрифужную пробирку
Закапайте 1 каплю УРА (универсального реагента) на дно пробирки пастеровской пипеткой
Добавьте 1 каплю исследуемых эритроцитов пастеровской пипеткой
Перемешайте обе капли так, чтобы они распределились по стенкам пробирки
Засеките время
Через 3 мин. добавьте 2-3 мл 0,9% натрия хлорида (до бледно-розового цвета)
Дважды аккуратно, не взбалтывая, переверните пробирку вверх дном, предварительно закрыв ее пробкой
Сразу же прочитайте результат в проходящем свете

Оценка результата:

Если произошла реакция агглютинации, резус-фактор положительный; если реакция не произошла – отрицательный.

Приложение № 8

Проба на совместимость по резус-фактору

- технически проводится так же, как определение резус-фактора.

Потребуется:

Две капли сыворотки реципиента
Одна капля эритроцитов донора
Одна капля 33% р-ра полиглюкина

Оценка результата:

Если через 5 мин. агглютинация не произошла, результат отрицательный.

Кровь донора совместима Кровь донора несовместима

с кровью больного с кровью больного

Приложение № 7

ПРОБА НА СОВМЕСТИМОСТЬ ПО ГРУППАМ КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВ0

Проба на совместимость по группам крови производится в течение 5 мин., на плоскости, при комнатной температуре, т.е. в условиях, при которых антитела (альфа и бета) наиболее активны.

Техника:

На тарелочке (пластинке) надписать фамилию, инициалы и группу крови больного, фамилию, инициалы, группу крови донора и номер флакона с кровью. На тарелочку накапать 2-3 капли сыворотки больного и туда же добавить маленькую каплю крови донора так, чтобы соотношение крови и сыворотки было примерно 1:10.

Кровь размешать с сывороткой, тарелочку слегка покачать, затем на 1-2 мин. оставить в покое и снова периодически покачивать, одновременно наблюдая за ходом реакции в течение 5 мин. Результат читать через 5 минут.

Оценка результата:

Если в смеси сыворотки больного и крови донора наступает агглютинация эритроцитов, значит, кровь больного несовместима с кровью донора и не должна быть перелита. Если смесь крови донора и сыворотки больного по истечении 5 мин. остается гомогенно красной, значит, кровь донора совместима с кровью больного по системе АВ0.

Кровь донора совместима Кровь донора несовместима

с кровью больного с кровью больного

Приложение № 9

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ПРОБА (ПРОБА ЭПИКЕРА)

Струйно перелить 10-15 мл. крови, после чего сделать интервал- паузу в течение 5 мин., при этом наблюдать за состоянием больного. При отсутствии явлений несовместимости (учащенного пульса, дыхания, появления одышки, затрудненного дыхания, гиперемии лица и т.д.) ввести вновь 15 мл. крови и в течение 5 мин. снова наблюдать за больным. Такую процедуру произвести 3 раза. Отсутствие реакции у больного после трехкратной проверки дает право врачу продолжить переливание данной крови.

Приложение № 10

StudFiles.ru

Определение в крови резус-фактора

Определение в крови резус-фактора производится врачами, прошедшими специальную подготовку на СПК и получившими сертификат.

Резус-фактор определяется с помощью стандартной сыворотки, в которой содержатся активные резус-антитела. Эта сыворотка готовится из крови лиц, сенсибилизированных к резус-фактору, это:

• резус-отрицательные женщины, сенсибилизированные к резус-фактору резус-положительным плодом во время беременности;

• доноры, у которых в крови обнаружены резус-антитела;

• лица, специально иммунизированные резус-антигеном;

• лица, перенесшие трансфузионные реакции или осложнения в связи с резус-конфликтом, в крови которых могут содержаться активные резус- антитела.

Готовая антирезусная сыворотка выпускается в ампулах или флаконах по 2-5 мл с наклеенными этикетками, на которых указано учреждение - изготовитель, номер серии, обозначена группа по системе AB0, специфичность, форма резус-антител и срок годности. На этикетках, по диагонали, наносят те же цветные полосы, что и на стандартных гемагглютинирующих сыворотках.

Сывороткой антирезус 0(I) группы определяют резус-фактор только в эритроцитах первой группы, сывороткой антирезус А(II) группы - в эритроцитах первой и второй групп, а сывороткой антирезус В (III) группы в эритроцитах первой и третьей группах крови. Сывороткой антирезус группы АВ(IV), специально приготовленной (универсальной), определяют резус-фактор в эритроцитах группы АВ(IV) и в других группах крови по системе AB0.

При каждом исследовании на резусную принадлежность необходимо ставить контроль для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус. Для контроля применяют стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты первой или той же группы, что и исследуемая кровь.

Кровь для исследования берут, в количестве 5 мл, в обычную пробирку без стабилизатора. На пробирке надписывают фамилию, инициалы, группу крови лица, у которого взята кровь, отделение и дату. После свертывания крови на дне образуется сгусток из эритроцитов, которые и следует брать для исследования. Если этих эритроцитов недостаточно, следует встряхнуть сгусток для отделения большего их количества.

Можно брать кровь с изотоническим раствором лимоннокислого натрия (0,25 мл на 1 мл крови), но в этом случае необходимо отмыть эритроциты. Для этого в пробирку доверху наливают изотонический раствор хлористого натрия, хорошо перемешивают и центрифугируют. Отмытые эритроциты берут для исследования.

Стандартные антирезусные сыворотки активны только в определенных условиях, поэтому методика определения резус-фактора этими сыворотками указывается в сопроводительной инструкции. Резус-фактор в крови можно определять следующими способами:

• с помощью универсального реагента в пробирках без подогрева;

• реакцией с применением 10% желатина в пробирках с подогревом (+46- 48°С);

• реакцией агглютинации в солевой среде;

• с помощью цоликлона анти-Д Супер.

На практике чаще пользуются первым способом. Стандартный универсальный реагент представляет собой смесь сыворотки АВ(IV) группы крови и 33% раствора полиглюкина в соотношении 2:1. Его приготавливают на СПК. Универсальный реагент не содержит групповых агглютининов (в сыворотке АВ(IV) группы крови их нет), поэтому он может быть использован для определения резус-антигена Д в эритроцитах любой группы крови системы AB0. Исследованию может подвергаться кровь, взятая из пальца, консервированная кровь и осадок эритроцитов в пробирке с кровью, взятой без стабилизатора, но после образования сгустка.

Методика проведения реакции:

1. В штатив устанавливают два ряда центрифужных пробирок объемом до 10 мл, по количеству образцов эритроцитов. Дополнительно устанавливают еще две пробирки, для контроля реакции с резус- положительными и резус-отрицательными эритроцитами. Попарно, из первого и второго ряда пробирок, производят надписи фамилии и инициалов лиц, у которых исследуют кровь.

2. Во все пробирки первого ряда и в две контрольные пробирки вносят по две капли стандартного универсального реагента-антирезус; во все пробирки второго ряда вносят по две капли изотонического раствора хлористого натрия и по одной капле 33% раствора полиглюкина;

3. В пробирки первого и второго ряда вносят по одной капле исследуемых эритроцитов; в первую контрольную пробирку вносят одну каплю стандартных резус-положительных эритроцитов, во вторую контрольную пробирку - такую же каплю стандартных резус-отрицательных эритроцитов.

4. Пробирки встряхивают, затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонтального уровня, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки, что делает реакцию более выраженной.

Оценка результатов исследования:

Агглютинация может появиться уже на первой минуте, но ожидать необходимо три минуты, так как реакция может быть замедленной. Через три минуты в пробирки наливают по 2-3 мл изотонического раствора хлористого натрия, перемешивают двух - трехкратным плавным переворачиванием пробирок (не встряхивать!). Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу, выявляя наличие или отсутствие агглютинации эритроцитов. Образцы эритроцитов, давшие агглютинацию с сывороткой антирезус, считаются резус-положительными, а не давшие агглютинации - резус-отрицательными.

В контрольных пробирках должна произойти аналогичная реакция - отсутствие агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами и наличие ее со стандартными резус-положительными эритроцитами. В пробирках второго ряда агглютинации быть не должно. Наличие агглютинации указывает на возможность ее появления за счет аутоантител. В таких случаях следует повторить реакцию с эритроцитами, отмытыми в теплом изотоническом растворе хлористого натрия, для удаления с них аутоантител. При сомнительном результате определения резус- принадлежности, следует применить метод агглютинации в солевой среде с использованием сыворотки антирезус, содержащей полные антитела, или провести исследование с цоликлонами анти-Д Супер.

Определение резус-принадлежности крови только по сыворотке анти-Д считается недостаточным. В случаях резус-отрицательной реакции необходимо дополнительное исследование сыворотками, содержащими антитела анти-С и анти-Е. В число резус-отрицательных засчитываются только лица, кровь которых не содержит ни одного из этих антигенов. Это особенно важно при обследовании доноров, беременных женщин с подозрением на изосенсибилизацию и некоторых других категорий больных.

Реакция агглютинации на плоскости

с помощью цоликлонов анти-D супер

1. Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.

2. Наносят рядом маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов. Тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой.

3. Через 10-20 секунд мягко покачивают пластинку.

4. Результаты реакции учитывают через 3 минуты после смешивания, несмотря на то, что четкая агглютинация наступает в первые 30 секунд.

5. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус положительная, при отсутствии - как резус отрицательная.

6. Для определения резус-принадлежности ускоренным методом на плоскости при комнатной температуре могут быть использованы поликлональные сыворотки анти-D с неполными антителами, приготовленные в комбинации с коллоидами (альбумином, полиглюкином).

Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холодильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде.

studopedia.ru

Техника определения резус – фактора экспресс - методом

Цель:определение резус- фактора.

Показания:гемотрансфузия.

Приготовить:пипетки, пробирки, физиологический раствор, универсальный антирезус-реагент, скарификатор, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки, песочные часы.

Алгоритм действия:

Внести пипеткой 2 капли сыворотки в конусную пробирку;

Добавить пипеткой 1 каплю крови;

Встряхнуть пробирку;

Добавить в пробирку 2 капли физиологического раствора;

Встряхнуть пробирку или вращать между ладонями в течении 5 минут;

Посмотреть на стенки пробирки и оценить результат. Если есть реакция, то у пациента резус-положительный фактор.

Примечание: температура воздуха должна быть в пределах 15- 25о С для профилактики ложной агглютинации.

Можно произвести определение резус-принадлежности с помощью цоликлона анти-Д

Техника постановки пробы на индивидуальную совместимость по АВ0

Цель:определить совместимость крови донора с кровью реципиента.

Показания:гемотрансфузия.

Приготовить:донорская кровь, сыворотка крови реципиента, стеклянные палочки, пипетки, чашка Петри, шприц, игла, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки, песочные часы.

Алгоритм действия:

Взять у пациента кровь до 5 мл в пробирку из вены;
Отцентрифугировать пробирку с кровью для получения сыворотки;
Нанести пипеткой на тарелку 1 каплю сыворотки пациента и мазок крови донора;
Смешать стеклянной палочкой сыворотку и кровь;
Добавить 1 каплю физиологического раствора;
Наблюдать за реакцией в течении 5 минут.
Если нет агглютинации, то проба отрицательная и кровь совместима и ее можно переливать.

Техника постановки пробы на индивидуальную совместимость по резус – принадлежности

Цель:определить совместимость крови донора с кровью реципиента.

Показания:гемотрансфузия.

Приготовить:донорская кровь, сыворотка крови реципиента, стеклянные палочки, водяная баня, пипетки, чашка Петри, шприц, игла, стерильные марлевые шарики, спирт, стерильный пинцет, стерильные перчатки, песочные часы.

Алгоритм действия:

Взять у больного кровь до 5 мл в пробирку;
Отцентрифугировать пробирку с кровью больного для получения сыворотки;
Нанести пипеткой на чашку Петри 1 каплю сыворотки больного и каплю крови донора;
Смешать стеклянной палочкой сыворотку с кровью;
Добавить 1 каплю физиологического раствора;
Поставить чашку Петри на водяную баню (температура – 50С);
Ждать результат в течении 10 минут.
Если агглютинация отсутствует, то проба отрицательная и переливать кровь можно.

studopedia.ru

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОЙ И РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ

В эритроцитах человека находятся аглютиногены, которые обозначаются буквами А и В. В сыворотке крови имеются антитела, которые называют агглютинины, их обозначают а и в . Агглютинины могут вступать в реакцию с одноименными агглютиногенами (А и а), (В и в), в результате чего происходит их склеивание (Агглютинация) с последующим растворением (гемолиз). В зависимости от наличия или отсутствия того или иного агглютиногена и агглютинина выделяют четыре группы крови:

первая группа 0 (I): в эритроцитах нет агглютиногенов, в сыворотке агглютинины а и в.
вторая группа А (II): в эритроцитах агглютиноген А, в сыворотке агглютинин в.
третья группа В (III): в эритроцитах агглютиноген В, в сыворотке агглютинин а.
четвертая группа АВ (IY): в эритроцитах агглютиногены А и В, в сыворотке нет агглютининов.

Для определения группы крови применяют стандартные сыворотки, которые имеют маркировку с указанием названия, N серии, срока годности и титра (степени разведения). Сыворотки выпускают различной окраски: 0 (I) - желтого цвета, А (II) - синего, В (III) - красного цвета.

В соответствии с обозначениями группу крови на белую фарфоровую тарелку, разделенную на 4 части с указанием групп крови пипеткой наносят по одной капле стандартной сыворотки I-III групп одной серии, отступя 3-4 см - сыворотки групп крови другой серии. Кровь для исследования берут из пальца, который тщательно обрабатывают. Исследуемую кровь наносят в центр тарелки. Затем сухими стеклянными палочками последовательно переносят капли крови ( каждая в 10 раз меньше количества сыворотки) к сыворотке и тщательно их перемешивают. Следует помнить, что каждую каплю сыворотки и крови нужно перемешивать новой сухой и чистой палочкой. Тарелку периодически покачивают. Результат оценивают через 5 минут, хотя агглютинация может начаться уже через 30 секунд. В той капле сыворотки и крови, где произойдет агглютинация эритроцитов, появляются хорошо видимые красные глыбки и зернышки; там, где агглютинации не происходит, капля крови и сыворотки равномерно окрашена в розовый цвет.

Определение группы крови следует проводить при температуре 15-20 градусов. Агглютинация иногда бывает ложной. Для ее исключения в каждую каплю сыворотки добавляют каплю изотонического раствора хлрида натрия и продолжают наблюдение при периодическом покачивании тарелки до истечения 5 минут.

При оценке результатов исследования сначала сравнивают результаты реакции в каплях с сыворотками одной и той же группы серий. Они должны быть одинаковыми. Различают следующие комбинации результатов:

если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию (т.е. все капли остались равномерно окрашенными, без признаков агглютинации), то исследуемая кровь не содержит агглютиногенов и является 1-й группы;
если агглютинация произошла в сыворотках групп I и III, а в сыворотке группы II остается равномерное окрашивание, то кровь содержит агглютиноген А и принадлежит ко II-й группе;
если агглютинация произошла в сыворотке крови групп I и II, а в сыворотке группы III остается равномерное окрашивание, то эта кровь содержит агглютиноген В и относится к III-й группе
если агглютинация произошла во всех трех сыворотках, исследуемая кровь содержит агглютиногены А и В, т.е. относится к IY группе; необходимо для контроля провести дополнительное исследование со стандартной сывороткой группы IY.

Установлено, что у большинства людей в эритроцитах содержится резус-фактор. Их кровь называют резус-положительной (Rh+). Следует помнить, что людям с резус-отрицательной (Rh-) кровью можно переливать только резус-отрицательную кровь.

Определение резус-принадлежности можно проводить с использованием универсальной сыворотки антирезус и контрольной сыворотки. Кровь для исследования берется из пальца одновременно с определением групповой принадлежности. На фарфоровой белой тарелке делают разметку с обозначением контрольной (К) и антирезус (А) сыворотки. В соответствии с маркировкой наносят по одной капле (0,1 мл) сывороток. Рядом с ними помещают по одной капле (в 2 раза меньше капли сыворотки) исследуемой крови и перемешивают отдельными стеклянными палочками. Тарелку периодически покачивают. Через 3-4 минуты в обе капли добавляют по 1 капле изотонического раствора хлорида натрия для предупреждения ложной агглютинации и продолжают наблюдение до истечения 5 минут:

если в капле с сывороткой антирезус имеется агглютинация, а вконтрольной ее нет, то исследуемая кровь резус-положительная;
при отсутствии агглютинации в обеих каплях исследуемая кровь резус-отрицательная.

Если наступила агглютинация в контрольной сыворотке, то необходимо повторное исследование крови в условиях лаборатории.

Перед переливанием крови, крове определения групповой и резуспринадлежности, проводят пробы на индивидуальную и биологическую совместимость:

проба на индивидуальную совместимость: в чашку Петри вносят 2 капли сыворотки крови больного и малую каплю (0,1 мл) крови донора и тщательно перемешивают. Чашку ставят на водяную баню (40-42 градуса) на 10 минут. Если агглютинации нет, то кровь индивидуально совместима;
биологическая проба: в/в струйно вводят 25 мл крови, системы перекрывают на 10 минут и вводят кровезаменители. Если нет признаков несовместимости (беспокойств, затрудненность дыхания, чувство давления, боли в пояснице и животе, озноб, учащение пульса и дыхания, снижение АД), то еще дважды проводят подобную пробу и затем выполняют трансфузию до конца.

Переливание крови может быть:

прямое: кровь донора в неизмененном виде при помощи специальных аппаратов переливают реципиенту
непрямое: используется консервированная кровь

Пути переливания при непрямом методе:

внутривенно: можно переливать капельно и струйно. Струйно лучше переливать в подключичную вену
внутрикостно: капельно в губчатое вещество костной ткани (крыло подвздошной кости, грудина)
внутриартериально: нагнетание крови производят путем повышения давления во флаконе с кровью за счет соединения длинной иглы флакона с резиновой грушей тонометра; чаще используют лучевую артерию.

Для определения пригодности к переливанию отстоявшейся крови необходимо исключить наличие в ней гемолиза:

в две пробирки наливают по 10 мл дистиллированной воды, в одну из них вносят 2 капли исследуемой крови и встряхивают. Если цвет воды остается одинаковым в обеих пробирках - явного гемолиза (явного) нет;
для определения скрытого гемолиза кровь отливают в пробирку и центрифугируют. Окрашивание плазмы после центрифугирования в розовый цвет говорит о наличии скрытого гемолиза (доброкачественная кровь имеет прозрачную плазму и равномерный слой осевшей массы, граница между ними четко выражены).

Хранящуюся кровь ежедневно просматривают с целью выявления возможных изменений. При появлении хлопьев, сгустков, розового окрашивания плазмы, а также по истечении срока хранения (10-21 день) кровь не годна к переливанию.

Существующие заменители крови можно разделить на две группы:

естественные заменители, являющиеся препаратами человеческой крови ( нативная и сухая плазма и сыворотка крови, альбумин сыворотки крови человека)
искусственные плазмозаменяющие средства.
Для переливания крови и кровезаменителей возможно использование одно- и многоразовых систем.

Прежде всего необходимо убедиться в целости упаковки, сроке сохранности, стерильности системы для трансфузии. Проверяют исправность фиксаторов для флакона. С флакона снимают наружные металлические диски пробок, дважды обрабатывают йодом. Флакон укрепляют в штативе. Руки обрабатывают как для обычной хирургической операции. Во время переливания крови следят за тем, чтобы воздух не попал в вену.

Первые 4-6 часов после переливания крови или кровезаменителей необходим строгий постельный режим. Наблюдение включает измерение температуры тела, АД, частоты пульса и дыхания каждый час с обязательной их регистрацией. Тщательно измеряется количество принятой жидкости и выделенной мочи. После каждого переливания на следующий день необходимо делать анализы крови и мочи.

Кровезамещающие жидкости делятся:

гемодинамические (противошоковые): полиглюкин быстро увеличивает объем циркулирующей крови или же предупреждает его снижение; реополиглюкин нормализует нарушение микроциркуляции; желатиноль применяют при шоке, гнойно-септических осложнениях; при переливании этих жидкостей возможны осложнения (тахикардия, снижение АД, гиперемия лица) прекратить введение препарата, ввести 10 мл 10 % хлорида кальция, 20 мл 40 % глюкозы, сердечные и антигистаминные средства. Для предупреждения осложнений необходимо проводить биологическую пробу;
дезинтоксикационные (гемодез): вводить со скоростью 40-80 капель в минуту, максимальная доза для взрослых 400 мл, для детей грудного возраста 5-10 мл/кг
препараты белкового парентерального питания (белковые гидролизаты и аминокислотные смеси)
регуляторы водно-солевого и кислотно-щелочного равновесия.

Кровезамещающие жидкости, применяемые с лечебной целью, должны быть апирогенны, нетоксичны, стерильны. При помутнении, изменении цвета, появлении осадка из взвеси во флаконе раствор применять нельзя. Категорически запрещается переливать содержимое флакона нескольким больным.

Наверх

studopedia.ru